论文摘要
第一部分临床研究目的探讨乳腺癌患者血浆凝血酶激活的纤溶抑制物（TAFI）水平及其编码区基因位点Thr147Ala （rs3742264）和Thr325lle （rs1926447）的基因多态性的改变在临床诊治中的作用以及与高凝状态的关系。方法选取256例乳腺癌患者为研究对象,健康体检正常的192例为对照组,ELISA及发色底物法分别测定血浆TAFI抗原、活性（TAFI Ag、TAFI Act）水平,应用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测TAFI Thr147Ala和Thr325lle位点的基因多态性。结果①TAFI的活性及抗原（TAFI Act、TAFI Ag）在病例组和对照组分别为30.5±2.8μg/ml、100.6±15.2%和23.5±1.6μg/ml、82.7±11.2%,病例组TAFI水平明显高于对照组,差异有显著性（P<0.001）。②乳腺癌患者TAFI抗原含量与活性水平随临床分期而增高,各期之间的差异具有显著性（P<0.001）。③TAFI Thr325lle基因多态性中,3种基因型Thr/Thr（CC）、Thr/lle（CT）、lle/lle （TT）的分布频率分别是19.9%,51.6%和28.5%,而对照组分别为34.4%,49.5%和16.1%,可见病例组含Ⅱe的形式,即lle/lle和Thr/lle显著高于对照组[OR:2.106;（95%CI:1.379-3.217, P<0.001）]。等位基因T在病例组的分布亦显著高于对照组[OR:1.718;（95%CI:1.316-2.243）; P<0.001]。④病例组和对照组Thr325Thr、Thr325lle、lle325lle三种基因型之间血浆’TAFI抗原水平具有显著性差异,其中Thr325Thr者血浆TAFI抗原水平最高,lle325lle者血浆TAFI抗原水平最低,差异有统计学意义（P<0.05）。⑤Thr147Ala基因多态性在病例组与对照组中的频率分布、以及与-TAFI抗原水平均无显著性差异（P>0.05）。结论①乳腺癌患者血浆TAFI水平显著高于对照组,且随临床分期而逐渐增高。②乳腺癌患者TAFI Thr325lle位点多态性表现为lle325lle （TT基因型）频率增高,提示热稳定性及抗纤溶活性增高。③TAFI抗原水平受Thr325lle位点多态性的影响,其中Thr325Thr（CC基因型）型最高,lle325lle（TT基因型）最低。④检测血浆TAFI水平及Thr325lle位点多态性可作为乳腺癌诊断及病情严重程度的指标。⑤乳腺癌患者体内呈现高凝状态,其原因既有凝血激活（血浆纤维蛋白原及D-二聚体水平增高）,又有纤溶活性降低（血浆TAFI抗原及活性水平增高）。提示临床对肿瘤病人应进行适当的抗凝治疗。第二部分实验研究目的探讨靶向CPB2基因的RNA干扰（RNAi）对乳腺癌MDA-MB-231细胞TAFI表达以及对乳腺癌细胞的生长和转移性的影响。方法以乳腺癌MDA-MB-231细胞系为研究对象,利用RNA干扰技术,通过设计小干扰RNA （siRNA）,靶向抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞系中CPB2基因的表达,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、蛋白质免疫印迹（Western Blot）检测转染脂质体siRNA后乳腺癌细胞中TAFI mRNA及蛋白的表达水平；应用Transwell侵袭实验检测干扰后MDA-MB-231细胞的侵袭能力；MTT实验测定转染后MDA-MB-231细胞的存活和生长情况。结果siRNA抑制CPB2表达后,’TAFI mRNA及其蛋白表达水平显著下降,蛋白抑制率从42.6%到55.4%；Transwell侵袭实验发现siRNA转染组穿膜细胞数84.80±4.82,显著低于对照组140.20±11.78（P<0.05）; MTT实验测定转染后MDA-MB-231细胞24和48小时的吸光度为0.750±0.034和0.420±0.042,显著低于对照组0.840±0.044和0.755±0.046（P<0.05）；乳腺癌MDA-MB-231细胞干扰后其生长、侵袭及转移能力均显著性被抑制。结论①RNAi技术成功抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞系中TAFI的表达,使得乳腺癌细胞TAFI mRNA和TAFI蛋白含量明显降低。②TAFI水平的降低能够抑制乳腺癌细胞的生长活性,同时能够明显降低乳腺癌细胞的侵袭力。③TAFI在乳腺癌细胞的发生和转移中具有重要作用,它可能成为新的乳腺癌肿瘤转移防治靶点之一。
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标签：乳腺癌论文; 凝血酶激活的纤溶抑制物论文; 基因多态性论文; 干扰论文; 侵袭实验论文;