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镉积累对黄颡鱼酶活及金属硫蛋白表达的影响

2020-12-11阅读(722)

镉积累对黄颡鱼酶活及金属硫蛋白表达的影响

论文摘要

本论文从组织细胞、生理生化以及分子水平上研究重金属镉对黄颡鱼机体的毒性影响,主要研究了不同浓度重金属镉在黄颡鱼各组织中的积累分布,镉对4种酶活性的影响、对金属硫蛋白表达量以及金属硫蛋白基因表达的影响。本实验将健康黄颡鱼置于0.05、0.5、1mg/L的镉环境中养殖,于6h、12h、24h、48h、72h、96h、144h分别取样测定不同指标,实验结果主要有:1镉在黄颡鱼内脏中的蓄积量远高于鳃盖、肌肉和皮肤等组织;肝脏、肾脏和鳃丝的镉蓄积量位居前三位,且随水体镉浓度的升高及镉处理时间延长而增大,呈现出明显的剂量-效应关系和时间-效应关系;肝脏镉蓄积量在低浓度率先大幅度升高,说明肝脏是重金属镉作用的靶器官,在解毒过程中最关键。2重金属镉胁迫下,黄颡鱼血清中乳酸脱氢酶（LDH）明显受到抑制,酸性磷酸酶（ACP）被激活,碱性磷酸酶（AKP）在低浓度镉胁迫下被激活,在高浓度中先被激活后又受到抑制,表现为Hormesis现象;鳃丝中AKP和ACP活性受抑制,过氧化氢酶（CAT）被激活,LDH表现为Hormesis现象;肝脏中AKP和ACP活性明显受到抑制,中高浓度组肝脏AKP在镉暴露初期被激活,24h后明显受到强烈抑制,出现了典型的Hormesis现象;肾脏中LDH活性在中高浓度组镉暴露24h后被激活,CAT激活程度与镉浓度正相关,ACP和高浓度组AKP活性明显受到抑制,低中浓度组AKP活性表现为Hormesis现象;肌肉中CAT和LDH活性成波形变化,AKP和ACP被激活。结果表明,重金属镉胁迫下,黄颡鱼通过调节机体各组织中不同酶的活性来维持机体内环境的稳态,然而当镉浓度及镉暴露时间超出机体承受范围时代谢酶活性受到不同程度的抑制;重金属镉对黄颡鱼正常的生理代谢产生了严重的影响。3黄颡鱼金属硫蛋白含量的本底值顺序为肝脏>肾脏>鳃丝;在水体镉胁迫下,黄颡鱼3种组织中的金属硫蛋白含量均表现为先增大后趋于平缓,这表明黄颡鱼金属硫蛋白的表达量受到水体中镉的诱导;诱导表达主要在镉暴露的0-12h内;且高浓度组的诱导作用强于低浓度组;组织中金属硫蛋白的表达量与水体中镉浓度呈正相关;肝脏和肾脏是评价镉污染的首选靶组织。4金属硫蛋白的RT-PCR半定量实验表明:黄颡鱼肝脏金属硫蛋白（MT）基因表达量随镉浓度升高而增大,并且1mg/L镉组与对照组产生了显著性差异;肝脏MT基因表达量在镉暴露初期迅速增大,并于12h与对照组产生了显著性差异,之后MT基因表达量稍有降低,并维持此水平,趋于平衡。结果表明,MT基因的表达分析可以作为一种重金属镉污染的早期检测指标。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第1章 绪论
  • 1.1 研究背景
  • 1.1.1 水环境重金属镉污染现状
  • 1.1.2 重金属镉对水产动物的影响
  • 1.1.3 金属硫蛋白
  • 1.2 研究目的及意义
  • 1.2.1 研究对象
  • 1.2.2 目的意义
  • 第2章 重金属镉在黄颡鱼各组织内的积累分布
  • 引言
  • 2.1 研究材料
  • 2.1.1 实验对象
  • 2.1.2 主要仪器
  • 2.2 研究方法
  • 2.2.1 实验设计
  • 2.2.2 样品处理
  • 2.2.3 测定方法
  • 2.2.4 数据分析
  • 2.3 结果分析
  • 2.3.1 水体镉浓度对黄颡鱼各组织内镉蓄积量的影响
  • 2.3.2 镉暴露时间对黄颡鱼各组织内镉蓄积量的影响
  • 2.4 讨论
  • 第3章 重金属镉对黄颡鱼各组织酶活性的影响
  • 引言
  • 3.1 研究材料
  • 3.1.1 实验对象
  • 3.1.2 主要仪器
  • 3.2 研究方法
  • 3.2.1 实验设计
  • 3.2.2 样品处理
  • 3.2.3 测定方法
  • 3.2.4 数据分析
  • 3.3 结果分析
  • 2+对黄颡鱼CAT 活性的影响'>3.3.1 Cd2+对黄颡鱼CAT 活性的影响
  • 2+对黄颡鱼LDH 活性的影响'>3.3.2 Cd2+对黄颡鱼LDH 活性的影响
  • 2+对黄颡鱼AKP 活性的影响'>3.3.3 Cd2+对黄颡鱼AKP 活性的影响
  • 2+对黄颡鱼ACP 活性的影响'>3.3.4 Cd2+对黄颡鱼ACP 活性的影响
  • 3.4 讨论
  • 第4章 黄颡鱼金属硫蛋白在镉胁迫下的动态表达分析
  • 引言
  • 4.1 研究材料
  • 4.1.1 实验对象
  • 4.1.2 主要仪器
  • 4.2 研究方法
  • 4.2.1 实验设计
  • 4.2.2 样品处理
  • 4.2.3 测定及计算方法
  • 4.2.4 数据分析
  • 4.3 结果分析
  • 4.3.1 黄颡鱼鳃丝金属硫蛋白在重金属镉刺激下的动态表达趋势
  • 4.3.2 黄颡鱼肝脏金属硫蛋白在重金属镉刺激下的动态表达趋势
  • 4.3.3 黄颡鱼肾脏金属硫蛋白在重金属镉刺激下的动态表达趋势
  • 4.4 讨论
  • 第5章 黄颡鱼肝脏金属硫蛋白基因在镉刺激下的表达分析
  • 引言
  • 5.1 研究材料
  • 5.1.1 实验对象
  • 5.1.2 主要仪器及试剂
  • 5.2 研究方法
  • 5.2.1 实验设计
  • 5.2.2 测定方法
  • 5.3 结果分析
  • 5.3.1 总RNA 提取
  • 5.3.2 黄颡鱼肝脏金属硫蛋白基因片段克隆
  • 5.3.3 黄颡鱼肝脏金属硫蛋白基因表达的半定量RT-PCR 分析
  • 5.4 讨论
  • 第6章 结语
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读学位期间取得的科研成果及获奖情况

    • 相关论文文献

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