菊花提取物效应成分在大鼠体内的分布和排泄研究

论文摘要

菊花（Flos Chrysanthemi）是菊科菊属植物菊（Chrysanthemum morifoliumRamat.）的头状花序,系亦食亦药的常用中药材,含绿原酸、黄酮、挥发油等成分。研究表明,木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷是菊花中主要的黄酮类化合物,也是其发挥抗氧化及舒血管作用的活性成分。动物口服菊花提取物（Chrysanthemum morifolium extract,简称CME）后上述黄酮苷类化合物在肠道微生物或小肠上皮细胞水解酶的作用下,会转化成相应的苷元,主要为木犀草素（5,7,3,4’-四羟基黄酮）和芹菜素（5,7,4’-三羟基黄酮）而被吸收。本实验室研究表明,木犀草素和芹菜素是口服CME后体内主要的效应成分。本研究室已经对菊花提取物体内主要效应成分——木犀草素及芹菜素的药代动力学、肝微粒体代谢进行了较系统的研究。本研究主要揭示木犀草素和芹菜素在大鼠体内的分布规律并比较在正常和心肌缺血病理状态下的分布差异,并通过考察木犀草素和芹菜素在大鼠尿液、粪便和胆汁中的排泄,以及对未知代谢物的分析,来初步了解CME在大鼠体内的排泄途径和形式,从而完善CME在动物体内过程的研究,并为CME的抗心肌缺血作用物质基础提供依据。一、菊花提取物效应成分在大鼠体内的组织分布研究1.健康大鼠单次口服菊花提取物后组织分布研究目的:建立大鼠组织中木犀草素和芹菜素的HPLC分析方法,研究CME效应成分在大鼠体内的组织分布规律。方法:健康SD大鼠（雄性）随机分为4组,单次灌胃CME 200mg/kg,各组分别于给药后0.17h、0.5h、4h、8h不同时间点处死,取出组织,制成匀浆,经酸水解预处理后HPLC测定各个组织中木犀草素和芹菜素的药物浓度。结果:在心、肝、脾、肺、肾、脑、肌肉、体脂、睾丸和胃肠道等组织中,菊花提取物效应成分木犀草素和芹菜素均有分布。在胃和小肠中浓度最高,其次是肝、肾、肺组织,在脑、睾丸的分布较低;木犀草素和芹菜素在大多数组织中于给药后0.5h到达峰值,与血药浓度达峰时间相似。结论:木犀草素和芹菜素在各器官的分布过程中,在给药后较短时间内即达最大浓度,分布速度快;且分布比较广泛。2.菊花提取物效应成分在心肌缺血模型大鼠体内的组织分布研究目的:比较大鼠在稳态正常情况下和心肌缺血病理状态下,木犀草素和芹菜素的分布情况,为菊花提取物抗心肌缺血物质基础的确定提供依据。方法:SD大鼠（雄性）随机分组为稳态正常组、预防给药组和治疗给药组,各组CME剂量均为200mg/kg。稳态正常组连续7天灌胃CME;预防给药组连续7天灌胃CME,于第6天给药后行冠状动脉结扎;治疗给药组于第一天给药前24h行冠状动脉结扎手术,后连续7天灌胃CME,各组大鼠于末次给药后0.5小时,处死,取出主要组织,测定各个组织中木犀草素和芹菜素的药物浓度,用t检验进行各组浓度比较。结果:预防给药组与稳态正常组相比,木犀草素和芹菜素在大部分组织中的分布均较低。治疗给药组与稳态正常组相比,木犀草素在大部分组织的浓度相似;芹菜素在心脏中表现为浓度显著增加。预防给药组与治疗给药组相比,治疗给药组中木犀草素和芹菜素在大部分组织中的浓度均高于预防给药组,血浆和心脏组织分布治疗给药组显著高于预防给药组,而预防给药组中木犀草素和芹菜素在脑组织和睾丸组织中分布较治疗给药组高或相似。结论:稳态正常组与预防给药组、稳态正常组与治疗给药组之间,木犀草素与芹菜素的分布存在差异,且两组给药方式造成在血流量大的组织中分布存在明显差异。二、菊花提取物效应成分在大鼠体内的排泄研究目的:研究CME效应成分在大鼠尿液、粪便和胆汁中的排泄,阐述其排泄规律、主要排泄途径和形式。方法:健康SD大鼠（雄性）单次灌胃CME 200mg/kg后,收集不同时间段的尿液、粪便和胆汁,尿液和胆汁样品经β-葡萄糖醛酸酶和硫酸酯酶水解处理,粪便样品经甲醇溶解超声处理后,以HPLC法分别测定木犀草素和芹菜素在尿液、粪便和胆汁中的浓度,计算两者各自的累积排泄率。结果:在给药后72h,木犀草素和芹菜素总的尿药排泄率分别为6.6%和16.6%;粪便中两者的排泄率分别为31.3%和28.6%,其总的排泄率为37.9%和45.2%。与此同时,在胆汁中两者也有一定的累积排泄量,分别占给药剂量的2.05%和6.34%。结论:木犀草素和芹菜素在尿和粪便中回收率均未达50%,推测两者可能降解为简单化合物或转化成其它代谢物形式排出体外;木犀草素和芹菜素结合物可能通过肠肝循环部分从小肠或结肠被分解和重吸收。三、菊花提取物在大鼠体内代谢产物研究目的:研究大鼠口服CME后尿液中发现的2个代谢产物（M1、M2）,找出其代谢途径。方法:尿样酶解后,经乙酸乙酯提取,与已知化合物的HPLC保留时间、UV光谱比对,并经HPLC-MS确证。结果:M2与已知化合物香叶木素（4’-甲氧基-5,7,3’-三羟基黄酮）在HPLC图谱上的保留时间一致、紫外吸收光谱相似。经HPLC-MS分析,代谢物M1、M2分子量相同,碎片大小相同,在相同碰撞能量下碎片丰度比不同,M1、M2均与已知化合物香叶木素具有相同分子量和相同碎片峰,其中代谢物M2的碎片丰度比与香叶木素基本一致。结论:推测两个代谢物为同分异构体,其中代谢物M2确证为香叶木素。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一章 菊花提取物效应成分在大鼠体内的组织分布研究
• 第一节 健康大鼠单次口服菊花提取物后组织分布研究
• 第二节 菊花提取物效应成分在心肌缺血模型大鼠体内的组织分布研究
• 参考文献
• 第二章 菊花提取物效应成分在大鼠体内的排泄研究
• 1.实验仪器、试药和实验动物
• 2.实验方法
• 3.实验结果
• 4.讨论
• 参考文献
• 第三章 菊花提取物在大鼠体内代谢产物研究
• 1.实验方法
• 2.检测条件
• 3.实验结果
• 4.讨论
• 参考文献
• 小结
• 附录
• 综述 黄酮类化合物的体内分布和排泄研究
• 在读期间发表论文和所获奖项
• 致谢