低血清培养技术在口蹄疫疫苗生产中的应用研究

论文摘要

为了尝试低血清培养基培养BHK-21细胞,进而生产口蹄疫病毒抗原,本研究驯化BHK-21细胞适应低血清培养基试验,并用不同血清含量的低血清培养基培养BHK-21细胞,增殖口蹄疫病毒,比较了不同血清浓度条件下细胞生长情况和口蹄疫病毒的滴度。驯化适应MEM SLM的BHK-21细胞株的比生长率、细胞数量等参数与对照组相近,在此基础上建立了低血清培养BHK-21细胞种子库。通过比较不同血清浓度条件下,细胞数量、比生长率、细胞活性、病毒滴度、成本投入和生产效率,确定了生产中3%的血清浓度。试验结果表明:①在T75小方瓶中培养,细胞数量2.288×107、比生长率2.03、细胞活性95.3%、病毒TCLD50 7.83、病毒LD50 8.00;②在3000ml小转瓶中培养,相应参数分别是5.871×108、1.70、94.6%、7.67、7.89;③在15000ml大转瓶中培养,相应参数分别是7.586×109、1.73、95.0%、7.72、8.22。本试验说明低血清培养基MEM SLM具有替代传统常规培养基生产口蹄疫疫苗的潜力。

论文目录

• 摘要
• Summary
• 文献综述
• 参考文献
• 1 前言
• 2 材料
• 2.1细胞系
• 2.2 病毒
• 2.3 培养基
• 2.4 其它主要试剂
• 2.5 实验动物
• 2.6 主要仪器和设备
• 3 方法
• 3.1 各种溶液配制
• 3.2 适应低血清培养基的BHK－21细胞株的筛选
• 3.3 细胞培养试验和细胞稳定性试验
• 3.4 低血清制备的细胞感染口蹄疫病毒
• 3.5 病毒的感染性滴度测定
• 3.6 细胞计数:方法为台盼蓝染色血球计数板计数法
• 3.7 低血清培养细胞中间试验及中试各要素的评价方法
• 4 结果和分析
• 4.1 正常 BHK－21 细胞形态
• 4.2 接种病毒后 BHK－21 细胞病变情况
• 4.3 BHK－21 细胞适应低血清培养基 MEM SLM 驯化
• 4.4 驯化的 BHK－21 细胞对低血清的适应
• 4.5 不同血清含量的MEM SLM 在静置和旋转培养条件下细胞生长特性
• 4.6 不同血清含量的MEM SLM 在静置和旋转培养条件下细胞接种 FMDV 结果
• 4.7 中间试验
• 4.8 低血清培养与常规培养 BHK－21 细胞直接生产成本比较
• 5 讨论
• 6 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介
• 导师简介