青藤碱和甲氨蝶呤预防类风湿关节炎的实验研究

论文题目: 青藤碱和甲氨蝶呤预防类风湿关节炎的实验研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 病理学与病理生理学

作者: 刘艳

导师: 贾玉杰

关键词: 降植烷诱导的关节炎,类风湿关节炎,青藤碱,氨甲蝶呤

文献来源: 大连医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 背景与目的: 类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种不明原因的慢性、全身性自身免疫性疾病,其易感性与遗传和环境因素有关,主要特征为关节肿痛、关节破坏和血管翳形成。关节炎的病情可有浮动,通常呈进行性关节破坏、变形、失去劳动能力。放射线影像学改变可在早期出现,大约 30%患者在发病 1 年内出现骨侵蚀,而 3 年内骨侵蚀发生率将升至 70%。至今尚未发现可治愈 RA 的药物。但是,近年来研究显示,在 RA 确诊后 3 个月内,给予改变病情抗风湿药(disease modifyingantirhumatic drugs, DMARDs)治疗,可减缓病情进展。早期治疗效果直接影响RA 的预后。 甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)为叶酸拮抗剂,具有强大的免疫抑制和抗炎作用,目前该药治疗 RA 效果好,且减缓 RA 的影像学改变,因而成为一线 DMARD。 清风藤用于治疗风湿性疾病已 1000 余年,青藤碱是从中药清风藤中提取出来的有效成分。既往研究显示,青藤碱可改善试验性关节炎大鼠的病情,如:胶原诱导关节炎(collagen induced arthritis ,CIA)、抗原诱导关节炎(antigeninduced arthritis ,AIA)和佐剂性关节炎 (adjuvant arthritis, AA)。但是,青藤碱对降植烷诱导的关节炎 (pristane induced arthritis, PIA)的作用目前尚不清楚,是否具有减缓 RA 病情进展的作用尚待研究。 降植烷诱导大鼠的关节炎是一种慢性、反复发作及进展性关节炎,与人类 RA非常相似,认为 PIA 是由 CD4+T 细胞介导的自身免疫性疾病。 本研究以 PIA 大鼠为研究对象,探讨青藤碱和 MTX 对 RA 的预防作用。 方法: 以 40 只雌性 Lewis 大鼠为研究对象,依据药物治疗情况将大鼠平均分为五组:正常组、模型组、MTX 治疗组、青藤碱治疗组及 MTX+青藤碱治疗组。除正常组外在大鼠的尾根部位皮内注射 0.2ml/只剂量的降植烷,以建立 PIA 模型,正常组大鼠皮内注射等量的生理盐水。正常组和模型组大鼠口服生理盐水(10mg/kg/d)共·2·8w。其它三组大鼠口服青藤碱(120mg/kg/d) 和/或 MTX(3.8mg/kg/w)共 8w;肉眼监测大鼠四肢发病情况并以 0～4 分记分。应用放射影像学及组织学评定骨及软骨的破坏情况。Pristane 免疫后 0、1、3、5、8w 采集血清,-80℃冻存。免疫 8w 时在乙醚麻醉下处死大鼠,取右踝关节在 10%中性福尔马林中固定,分离腹股沟淋巴结和左踝关节滑膜-,80℃冻存。用放射免疫法检测血清 IL-6 和 IL-10 含量,用 ELISA法检测血清中 TIMP 的含量。利用 Trizol 提取淋巴结和滑膜总 RNA,然后,用 RT-PCR试剂盒扩增 cDNA,检测 IL-4、IL-10 和 IFN-γ的表达。PCR 产物进行半定量琼脂糖凝胶电泳成像分析。结果:1.模型组大鼠关节炎在降植烷免疫 2w 后突然发病,3w 后减轻, 6-8w 病情反复,以周围关节受累为主,发病率为 62.5%,关节 X 线摄片及病理显示关节滑膜增生、软骨组织及骨组织呈典型的关节炎病变。2.青藤碱治疗组 PIA 发病率为 75%,其关节炎指数与模型组没有显著性差异 ;MTX治疗组与青藤碱+ MTX治疗组PIA发病率均为12.5%,关节炎指数在造模后23～24d 明显低于模型组(p<0.05)。青藤碱治疗组比模型组的关节病理和 X 线检查结果略减轻;MTX 治疗组和青藤碱+ MTX 治疗组的关节病理和 X 线检查没有关节炎表现。3.PIA 模型大鼠血清 IL-6 水平在降植烷免疫后的 1、3、8w 增高,与免疫前比较有显著性差异(p<0.05),出现 2 次高峰分别在 1 和 8w;5 周时 IL-6 下降,与 1w 比较有显著性差异(P<0.05)。PIA 模型大鼠血清 IL-10 水平比正常组高,但无显著性差异;在腹股沟淋巴结和踝关节滑膜表达增高的细胞因子有 IFN-γ、IL-4和 IL-10。模型组大鼠血清 TIMP 水平在降植烷免疫后 1w 与 3、8w 比较明显升高(p<0.05),但在同一时点与其它组比较无显著性差异。4.MTX 治疗组和 MTX+青藤碱治疗组血清 IL-6 水平在降植烷免疫后 1、3、8w与模型组比较均有显著性差异(p<0.05);腹股沟淋巴结 IL-4 、IL-10 和 IFN-γmRNA 表达及血清 IL-10 水平与模型组比较明显降低(p<0.05)。5.青藤碱治疗组血清 IL-6 水平在降植烷免疫后 1、3、8w 与模型组比较均有显著下降(p<0.01),且在 1w 时与 MTX 治疗组比较下降明显(p<0.01);血清 IL-10和 TIMP、踝关节滑膜 IL-4 mRNA 表达及腹股沟淋巴结 IL-4 和 IFN-γ mRNA 表达与模型组比较均无显著性差异。结论:1.PIA 大鼠模型与人类 RA 发病及病理特点极为相似,是研究 RA 较理想的模型。2.PIA 大鼠的发病机制可能与 IL-6 和 IFN-γ表达上调、IL-4 和 IL-10 产生

论文目录:

一、论文

（一） 中文摘要

（二） 英文摘要

（三） 前言

（四） 材料与方法

（五） 结果

（六） 讨论

（七） 结论

（八） 参考文献

二、文献综述

（一） 综述一

（二） 参考文献

（三） 综述二

（四） 参考文献

三、致谢

四、个人简历

五、英文缩略词表

发布时间: 2005-07-27

参考文献

• [1].髓系来源的抑制性细胞在胶原诱导性关节炎发病机制及青藤碱对其干预作用的研究[D]. 冯知涛.南方医科大学2014
• [2].青藤碱联合甲氨蝶呤抑制类风湿关节炎骨破坏的作用及机制研究[D]. 丁从珠.南京中医药大学2012

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