杜仲中活性成分的提取分离纯化技术研究

杜仲中活性成分的提取分离纯化技术研究

论文摘要

杜仲属于杜仲科植物(Eucommia ulmoides Oliv),始载于《神农本草经》,是我国的传统经济作物。杜仲中含有丰富的化学物质,如苯丙素类、环烯醚萜类、木脂素类等,并具有多种药效,如保肝利胆、抑菌消炎、增强抵抗力、降血脂、降血压等。本论文对杜仲中的活性成分进行提取、分离纯化、检测等技术深入的研究,为杜仲深加工、综合开发获取最佳工艺路线。1、对杜仲皮中活性成分的提取工艺进行研究。通过对索氏提取法、浸提法、超声波提取法这三种提取方法的比较,所得出的京尼平苷酸(GPA)、京尼平苷(GP)、绿原酸(CA)、松脂醇二葡萄糖苷(PDG)的含量结果显示,超声波提取法提取快速、高效,并确定了较好的工艺参数。2、建立了PR-HPLC检测方法。突破前人的研究方法,本方法可同时检测出三大类化合物四种有效成分(GPA、CA、GP、PDG)含量,并且操作简单、快速准确、重现性好,为杜仲药材及健康食品的质量控制提供检测依据。检测方法为:采用Kromasil C18柱(200mm×4.6mm,5μm),乙腈-0.1%磷酸水溶液梯度洗脱,线性洗脱梯度:0-7min, 7%B,7-35min,14%B,35-45min,15%B,流速为1.0mL/min,检测波长235nm,柱温30℃。在该色谱条件下,京尼平苷酸,绿原酸,京尼平苷,松脂醇二葡萄糖苷的质量浓度分别在0.1025-0.5125μg/mL(R2=0.9999),0.0925-0.4625μg/mL(R2=0.9999),0.120-0.600μg/mL(R2=0.9996),0.090-0.450μg/mL(R2=0.9998)范围内与色谱峰面积呈现良好的线性关系,平均加标回收率(n=5)为96.06%,96.22%,96.12%,96.08%,RSD分别为1.39%,1.82%,1.53%和1.59%。3、试验研究了杜仲中绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷分离纯化工艺。通过对杜仲中绿原酸、松脂醇二葡萄糖苷的静态吸附分离,从9种大孔树脂中获得XDA-1为最优纯化材料。确定优化分离纯化工艺为:绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷分别取pH值为3-4、5-6,杜仲粗体液上样液体积为40mL,上柱吸附6h后,用纯净水去杂后,分别用50%、80%的乙醇水以1.0mL/min的流速冲洗,绿原酸洗脱液体积为4BV,松脂醇二葡萄糖苷的洗脱液体积为7BV,收集乙醇洗脱液,浓缩干燥后。得初步纯化的绿原酸和松脂醇二葡萄糖苷。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 第一章 文献综述
  • 1 前言
  • 2 杜仲的生物学状性
  • 3 杜仲中的主要几种化学成分和综合价值
  • 3.1 木脂素类(Lignans)
  • 3.2 环烯醚萜类(iridoid)
  • 3.3 苯丙素类化合物(phenylpropanoids)
  • 3.4 黄酮类化合物(flavonoids)
  • 3.5 多糖(polysaccharide)
  • 3.6 杜仲胶(gutta-percha)
  • 3.7 其它成分
  • 3.7.1 氨基酸(amino acid)
  • 3.7.2 维生素(vitamin)
  • 3.7.3 微量元素(microelement)
  • 3.7.4 萜类化合物(terpenoid)
  • 4 杜仲的药理作用
  • 4.1 降压作用
  • 4.2 抗炎抗病毒作用
  • 4.3 抗癌防癌作用
  • 4.4 保肝利胆活性及利尿作用
  • 4.5 抗氧化、抗衰老、预防肌肉骨骼老化
  • 4.6 其它药用
  • 5 杜仲的综合价值
  • 5.1 材料科学作用
  • 5.2 饲料方面
  • 6 杜仲中活性成分的提取纯化
  • 6.1 杜仲中绿原酸的研究
  • 6.2 杜仲中的环烯醚萜类化合物的研究
  • 6.3 杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的研究
  • 6.4 杜仲中总黄酮的研究
  • 7 杜仲中活性成分的测定
  • 7.1 薄层色谱
  • 7.2 分光光度法
  • 7.3 色谱法
  • 8 国内外的杜仲研究动态
  • 9 本课题研究的目的和意义
  • 第二章 杜仲中活性成分提取方法比较
  • 1 仪器与试药
  • 1.1 仪器
  • 1.2 试剂与试药
  • 1.3 提取溶剂的选择
  • 2 索氏提取法
  • 2.1 提取条件优化的正交设计
  • 2.2 交试验结果分析
  • 3 浸提法
  • 3.1 实验方法
  • 3.2 提取条件优化的正交设计
  • 3.3 交试验结果分析
  • 4 超声波提取法
  • 4.1 实验方法
  • 4.2 提取条件优化的正交设计
  • 4.3 正交试验结果分析
  • 5 结论
  • 第三章 杜仲中几种主要活性成分的检测
  • 1 仪器与试药
  • 1.1 仪器
  • 1.2 试剂与试药
  • 2 实验方法与结果
  • 2.1 标准品溶液的制备
  • 2.2 供试品溶液的制备
  • 2.3 色谱条件
  • 2.4 线性关系考察
  • 2.5 精密度实验
  • 2.6 重复性实验
  • 2.7 稳定性实验
  • 2.8 回收率实验
  • 2.9 样品测定
  • 3 结论与分析
  • 第四章 杜仲中活性成分的纯化
  • 1 仪器与试药
  • 1.1 仪器
  • 1.2 试剂与试药
  • 1.3 杜仲粗提液的制备
  • 1.4 测定方法
  • 1.5 大孔树脂的预处理及再生
  • 1.5.1 大孔树脂的预处理
  • 1.5.2 大孔树脂的再生
  • 1.6 大孔树脂的静态吸附试验
  • 1.6.1 吸附量和吸附率的测定
  • 1.6.2 解吸率的测定
  • 2 结论与分析
  • 3 树脂静态吸附条件
  • 3.1 XDA-1大孔树脂的动力学过程研究
  • 3.2 不同pH值提取液对树脂吸附的影响
  • 4 结论与分析
  • 5 XDA-1大孔树脂洗脱剂浓度的选择
  • 6 XDA-1大孔树脂动态吸附-洗脱试验
  • 6.1 上样过程
  • 6.2 最佳洗脱速度的选择
  • 6.3 最佳上样体积的选择
  • 6.4 洗脱剂用量的考察
  • 7 结论与分析
  • 全文结论
  • 参考文献
  • 致谢
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