鲤春病毒血症病毒外膜蛋白G和基质蛋白M的原核表达及多克隆抗体的制备

论文摘要

鲤春病毒血症是一种急性、出血性传染病,具有较高的致死率,已给多国的鲤鱼养殖业带来严重的经济损失。其病原为鲤春病毒血症病毒（Spring Viremia of Carp Virus, SVCV）,隶属于弹状病毒科水泡性病毒属。我们根据SVCV基因组序列（GenBank:NC002803）,人工合成了该病毒的两种主要结构蛋白的开放性阅读框序列—G蛋白基因序列和M蛋白基因序列,克隆至pMD19-T载体,经酶切、测序验证后,再将其克隆至原核表达载体pET-32a（+）,转化表达菌株BL21 （DE3）,经表达条件的优化,在O.1mmol/L IPTG,37℃条件下诱导5-6h,可实现G蛋白和M蛋白的高效表达,但二者均主要以包涵体的形式存在,分别以割胶回收、His亲和纯化的方法获得纯化的G蛋白和M蛋白。将纯化的蛋白分别免疫新西兰大白兔,制备了这两种结构蛋白的兔抗多克隆血清；ELISA检测显示,G蛋白兔抗血清的效价高达1：2560000,而M蛋白的兔抗血清效价为1:64000。Western blot分析表明,G蛋白的兔抗血清与细胞培养的SVCV蛋白反应时有两条特异性反应条带,这可能与G蛋白的表达后剪切有关；M蛋白的兔抗血清可特异性的识别SVCVM蛋白。本研究为进一步开发SVCV的免疫诊断技术及G基因和M基因的功能研究提供了重要理论基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中文文摘
• 目录
• 绪论
• 1.1 课题背景
• 1.2 文献综述
• 1.2.1 分类地位
• 1.2.2 鲤春病毒血症的危害
• 1.2.3 流行特点
• 1.2.4 SVCV的生物学特性
• 1.2.5 SVCV分子生物学特征
• 1.2.6 诊断与防治
• 1.3 本研究的目的、意义
• 第一章 SVCV G蛋白和M蛋白的表达、纯化
• 1.1 材料
• 1.1.1 试验试剂
• 1.1.2 试验菌株
• 1.1.3 主要仪器
• 1.2 方法
• 1.2.1 SVCV G蛋白在大肠杆菌中的表达纯化
• 1.2.2 SVCV M蛋白在大肠杆菌中的表达纯化
• 1.3 结果与分析
• 1.3.1 目的基因的克隆
• 1.3.2 表达质粒的构建
• 1.3.3 目的蛋白的表达纯化
• 1.4 讨论
• 第二章 SVCV G蛋白和M蛋白多克隆抗血清的制备
• 2.1 材料
• 2.1.1 试验材料
• 2.1.2 试验动物
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 主要仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 兔抗多克隆血清的制备
• 2.2.2 间接酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清抗体效价
• 2.2.3 兔抗多克隆血清的Western blot分析
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 兔抗血清的制备
• 2.3.2 兔抗血清的特异性检测
• 2.4 讨论
• 结论
• 附录
• 参考文献
• 攻读学位期间承担的科研任务与主要成果
• 致谢
• 个人简历