论文摘要
目的通过研究骨髓增生异常综合征（Myelodysplastic Syndromes, MDS）患者外周血/骨髓的髓源性抑制细胞（Myeloid-derived suppressor cells, MDSC）数目、功能变化,以及对MDS患者CD8+T细胞的影响,证实MDSC在MDS患者中数量增高,功能增强,并与疾病恶性程度相关,在体外实验中显示对MDS患者CD8+T细胞具有抑制作用。提示MDSC对于MDS的细胞免疫具有负调控作用,可能在MDS疾病进展以及向急性髓系白血病转化的过程中起到重要作用。对于进一步阐明MDS发病机制、制定相关的生物学靶向性治疗均具有重要意义。方法研究对象为天津医科大学总医院自2011年3月至2012年12月初治MDS患者、治疗后不同转归的MDS患者及正常对照。第一部分研究MDS患者外周血MDSC数量变化。采用流式细胞术（FCM）检测35例MDS初治患者及20名健康正常人外周血MDSC（Lin-HLA-DR-CD33+）数量,同时将MDS患者按IPSS/WPSS评分进行分层分析,并动态观察治疗后14例患者外周血MDSC数量的变化。分析MDSC与MDS患者血象、体内瘤负荷等指标的相关性。第二部分研究MDS患者骨髓MDSC数量变化与主要功能酶的表达。流式细胞技术检测30例MDS患者骨髓MDSC数量,并与19名正常人对比。FCM分选其中14例患者与14名正常人骨髓MDSC,荧光定量RT-PCR技术检测MDSC的精氨酸酶1（ARG-1）与诱导型一氧化氮合成酶（iNOS） mRNA水平表达,Western Blot免疫印迹法检测其蛋白水平表达。第三部分分选14例MDS患者骨髓MDSC与CD8+T细胞（分别以FCM与免疫磁珠分选获得）,将分选后MDSC与CD8+T细胞进行混合细胞培养24-48小时,检测培养后CD8+T细胞凋亡比例与其功能性细胞因子（IFN-γ、TNF-β）分泌水平,与未混合培养组CD8+T细胞对比。结果第一部分MDS患者外周血MDSC比例明显高于正常对照组（1.61%vs0.83%,P=0.033）；而在MDS患者的分层分析中,IPSS评分的IPSS>1组（中危2+高危）患者MDSC比例明显高于IPSS≤1组（低危+中危1）患者（4.45%vs0.63%,P=0.003）；WPSS评分的高危组（高危+极高危）患者MDSC比例明显高于低危组（极低危+低危+中危）患者（4.39%vs0.47%, P=0.002）; MDS患者MDSC比例与血红蛋白（Hb）水平呈负相关（r=-0.214,P=0.022）,与骨髓CD34+细胞比例呈正相关（r=0.274,P=0.042）,与血清乳酸脱氢酶（LDH）水平呈正相关（r=0.406, P=0.001）; MDS患者治疗前后对比，病情改善者MDSC比例下降,病情进展者MDSC比例升高,病情稳定者无明显变化。第二部分MDS患者IPSS>1组（中危2+高危）的MDSC,其ARG-1与iNOS的nRNA表达均明显高于IPSS≤1组（低危+中危1）（ARG17.99±4.23vs1.02±0.88, P=0.004; iNOS2.28vs1.28, P=0.002）;而在蛋白水平检测,ARG1蛋白表达增高,iNOS蛋白表达无明显增高。第三部分患者MDSC与CD8+T细胞进行混合培养后,CD8+T细胞凋亡比例（（64.17±4.86）%）明显高于未混合培养组CD8+T（（54.58±9.95）%, P=0.01）.混合培养后,CD8+T细胞分泌IFN-γ水平（（551.94±47.39）pg/ml）较未混合培养组CD8+T细胞（（586.04±46.65）pg/ml）下降（P=0.022）；混合培养后CD8+T细胞TNF-β分泌水平（（216.54±19.46）ng/L）较未混合培养组CD8+T细胞（（225.61±26.68）ng/L）有下降趋势,但差异无统计意义（P=0.100）。结论（1）MDS患者外周血MDSC比例增高,并随着疾病危险程度增加而上升。在临床指标中,MDSC与患者Hb水平成负相关,同时,MDSC与反映MDS恶性克隆负荷的骨髓CD34+细胞比例、血清LDH水平成正相关,并随着疾病不同转归而呈现同步变化。提示MDSC在MDS患者中的生成与募集上调,并与疾病状态相关。（2）MDS患者骨髓MDSC比例较正常人增高。MDSC的主要活化功能酶ARG-1的表达在mRNA水平、蛋白水平均上调,提示MDSC的功能增强,并与疾病危险程度具有相关性。（3）患者MDSC与CD8+T细胞进行混合培养后,显示MDSC具有促进CD8+T细胞凋亡的效应,并抑制其细胞因子IFN-γ的分泌。提示MDS患者MDSC在体外对免疫效应细胞有负调控作用,可能参与MDS恶性克隆免疫逃逸的发病机制。
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