刺五加关节腔注射干预兔膝骨性关节炎的实验研究

论文摘要

目的：探讨刺五加关节腔注射治疗原发性膝关节骨性关节炎的作用机制。方法：进行实验研究，64只新西兰白兔随机分为4组（每组16只），16只不造模作为正常组，其余48只用内侧半月板部分切除的方法造模，最后分为正常组、刺五加组、透明质酸钠组，模型组，正常组既不造模也不给药，刺五加组给予刺五加注射液0．5ml／只术侧关节腔注射，透明质酸钠组给予0．3ml／只术侧关节腔注射，模型组只造模。术后2周开始用药干预，直到处死前1周。分6周和10周两个时相点采集血清和关节液，测定血液和关节滑液中NO、iNOs、SOD、MDA水平。同样，分两个时相点处死动物取材，肉眼观察关节软骨及滑膜，骨赘和软骨溃疡，拍膝关节X线片，观察软骨下骨的硬化情况。制备软骨及滑膜石蜡切片HE及AB-PAS染色，对软骨和滑膜分别在光镜下进行病理评分。用末端原位标记检测软骨细胞凋亡状况，免疫组化法检测bcl-2在软骨中的表达，并检测尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）在滑膜上的表达。结果：正常组关节面光滑有光泽，软骨透明，无明显缺损和新生物，滑膜无充血。6周时，可见刺五加组和HA膝关节有轻度病变，模型组病变较前者稍重。1 0周时，模型组关节面不光滑，无光泽，软骨不透明，有明显缺损和新生物，滑膜色暗充血肿胀；刺五加组软骨色泽较暗，可见溃疡形成较表浅，透明度差，有少到中等量骨赘形成．透明质酸钠组关节面见溃疡生成较表浅，滑膜肿胀，骨赘形成较多。随时间增长病变有加重的趋势，病理学评分分值增高。X线检查显示手术3组动物在6周时内侧关节间隙狭窄，胫骨平台软骨下骨密度轻微增高，可有少许骨赘生成；10周时上述变化更加明显。HE及AB-PAS染色可见：除正常组外，软骨的完整性均不同程度的遭到破坏。AB-PAS不同程度的基质失染，表示各手术造模组蛋白多糖有不同程度的丢失。还可见软骨中不同程度的新生血管和纤维化变，其中以模型组最严重，且10周组较6周组病变严重。6周时模型组血清及滑液中的NO较正常组有明显的升高（P＜0．05），刺五加组和HA组的NO值无明显升高（P＞0．05），HA组和模型组iNOs较正常组有所升高（P＜0．05），刺五加组未见明显变化（P＞0．05），HA组iNOs较刺五加组上升明显（P＜0．05）。各手术造模组的SOD较正常组都有明显的降低（P＜0．05），各手术造模组MDA较正常组有明显增高。10周时各手术造模组的血清及关节滑液中的NO、iNOs、MDA水平较正常组有明显的升高，以模型组升高最明显（P＜0．05）。HA组NO水平较刺五加组上升明显（P＜0．05）。各手术造模组的SOD水平较正常组有明显的降低（P＜0．05），刺五加组SOD水平又高于HA组（P＜0．05）。HA组MDA和iNOS水平似乎略高于刺五加组，但是无统计学意义。6周与10周两个时相点相比较，血清和关节滑液中的NO、iNOS及MDA水平有较明显的上升趋势（P＜0．05），SOD水平有明显的下降趋势（P＜0．05）。两个时相点，刺五加组和HA组的凋亡率低于模型组（P＜0．05），bcl-2的表达高与模型组（P＜0．05），刺五加组与HA组之间无差别（p＞0．05）。在6周时，手术造模各组滑膜中uPA表达强于正常组（P＜0．05），其中HA组和刺五加组的表达要弱于模型组（P＜0．05）。到1 0周时，HA组、刺五加组和正常组uPA表达较6周时未见明显变化，只有模型组的可以见有增加趋势但不具有统计学意义。结论：刺五加注射液可以减缓实验性兔膝关节骨性关节炎的病程进展，其机理可能是：1、刺五加注射液通过对滑膜与软骨两个途径减缓关节退变。2、刺五加有可能通过其活血化瘀，免疫稳定和糖皮质激素样作用，减轻滑膜病变，抑制巨噬细胞活化，从而下调iNOS从而减少NO的生成量，并且下调uPA在滑膜中的表达，减少炎症细胞因子的生成，从而降低细胞凋亡指数，减轻软骨的病变。3、刺五加是抗氧化剂，可升高关节液中SOD和软骨中的bcl-2水平，降低MDA水平，从而减少氧化应激对软骨细胞的损害，抑制软骨细胞凋亡。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 前言
• 正文
• 实验1 刺五加关节腔注射对兔KOA大体及光镜下组织学的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 实验2 刺五加对兔KOA滑液和血清NO,INOS,SOD,MDA水平的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果与分析
• 实验3 刺五加对兔KOA软骨细胞凋亡的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果与分析
• 实验4 刺五加对兔KOA滑膜UPA表达的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果与分析
• 讨论
• 1 骨性关节炎动物模型的选择
• 2 给药方法的选择及刺五加的确定
• 3 观察指标与OA的关系
• 4 刺五加治疗OA的机理
• 结语
• 参考文献
• 附录
• 参考文献
• 致谢