猪尿中磺胺类药物残留的胶体金试纸条检测方法的建立及初步应用

论文摘要

胶体金免疫层析检测技术作为新的免疫学快速检测方法,已经广泛应用于兽医药物残留的快速检测领域。目前,磺胺类药物残留的快速检测是兽医药物残留检测中的主要研究对象之一本研究是在本实验室已建立的胶体金试纸条制备方法的基础上,通过对这些制备方法的优化,建立了适合于猪尿中快速检测磺胺类药物残留的胶体金免疫层析试纸条的方法,并对其进行了鉴定和初步应用,取得了如下结果：1.应用1.0 mg/mL抗磺胺类母核结构（SDL）的单抗IgG来分别标记直径为15 nm、25 nm的两种胶体金,最适蛋白标记量为：77μg/mL,并将这两种已标记胶体金的混合物作为示踪物。利用0.33 mg/mL人工合成抗原HSA-SDL （1:20）作为检测线；1.0 mg/mL兔抗鼠IgG多克隆抗体作为质控线,制备SDL胶体金免疫层析快速检测试纸条,并对其灵敏度,特异性进行鉴定。实验表明,该试纸条对磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺对甲氧嘧啶（SMD）、磺胺二甲氧嘧啶（SDM）、磺胺嘧啶（SD）均具有的交叉反应性,且机读检测灵敏度均为2 ng/mL,符合国家规定的磺胺类药残留最高检测限100 ng/mL。2.在饲料中按一般治疗剂量添加磺胺间甲氧嘧啶（SMM）饲喂10头大白猪,采集猪尿样品用试纸条进行检测,测得回收率在62.9%-106.7%范围内,变异系数均小于15%。动物试验结果表明,人工给药组在给药后第1d、2d、3d、4d,停药后第1 d、2 d,测得猪尿样品中磺胺间甲氧嘧啶残留超过100 ng/mL,即均为阳性；阴性对照组检测为阴性；停药后第3 d、4 d、5 d、6 d,测得猪尿样品中磺胺间甲氧嘧啶残留低于100 ng/mL,即停药后第3d开始转为阴性。通过对猪尿样品检测的试纸条法和商品化ELISA试剂盒法的比较,两者的阳性符合率为85.7%（24/28）,阴性符合率为87.1%（27/31）,总符合为92.7%[（24+27）/55]。3.于某猪场采集猪尿样品共200份,用磺胺类药物残留胶体金免疫层析快速试纸条进行检测,以磺胺类药物残留浓度低于100 ng/mL判为阴性（-）,残留浓度高于100 ng/mL判为阳性（+）,检测出1份阳性样品,其余均为阴性。将此阳性样品和随机抽取的3份阴性样品用ELISA试剂盒法进行检测。测得阳性样品OD值为：0.051；随机抽取的3份阴性样品OD值分别为：0.251、0.342、0.549；代入EILSA标准曲线：y=-0.5373x+0.8275,R2=0.9578计算所得：126.28 ng/mL、87.35ng/mL、73.86 ng/mL、50.43 ng/mL。实验表明两种检测方法的阳性符合率、阴性符合率和总符合率均为100%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语（Abbreviation）
• 1 文献综述
• 1.1 兽药残留概述
• 1.1.1 兽药残留原因
• 1.1.2 兽药残留现状
• 1.1.3 我国兽药残留的监控体系
• 1.1.4 兽药残留危害
• 1.2 磺胺类药物残留
• 1.2.1 磺胺类药物概述
• 1.2.1.1 磺胺类药的基本结构特征
• 1.2.1.2 磺胺类药物的代谢
• 1.2.2 磺胺类药的残留
• 1.2.2.1 磺胺类药的残留
• 1.2.2.2 国际国内对磺胺类药物的残留的限量
• 1.2.3 磺胺类药物残留检测方法的研究进展
• 1.2.3.1 仪器分析方法
• 1.2.3.2 免疫分析方法
• 1.2.3.3 微生物法检测法
• 2 研究的目的及意义
• 3 材料与方法
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 主要仪器
• 3.1.2 试剂与材料
• 3.1.3 溶液配制方法
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 试纸条的制备及优化
• 3.2.1.1 胶体金的制备
• 3.2.1.2 胶体金的鉴定
• 3.2.1.3 胶体金标记抗磺胺类药母核结构（SDL）单克隆抗体的制备
• 3.2.1.4 胶体金结合垫上包被金标单抗
• 3.2.1.5 兔抗鼠IgG（C线）和抗原的包被（T线）
• 3.2.1.6 样品垫封闭液中添加剂选择
• 3.2.1.7 控线与检测线包被液的选择
• 3.2.1.8 磺胺类药物残留快速检测试纸条的组装
• 3.2.2 试纸条性能测定
• 3.2.3 试纸条的应用
• 4 结果与分析
• 4.1 胶体金的鉴定
• 4.2 胶体金标记抗磺胺类药母核结构（SDL）单克隆抗体的制备
• 4.2.1 最佳标记量的确定
• 4.2.2 免疫金的混合
• 4.3 样品垫封闭液中添加剂选择
• 4.4 质控线与检测线包被液的选择
• 4.5 试纸条的性能测定
• 4.5.1 灵敏度试验
• 4.5.2 特异性试验
• 4.5.3 稳定性试验
• 4.5.4 添加回收试验
• 4.6 试纸条的应用
• 4.6.1 动物试验
• 4.6.2 临床试验
• 5 讨论
• 5.1 胶体金的制备与标记
• 5.2 不同颗粒大小的免疫胶体金混合
• 5.3 样品垫的封闭
• 5.4 试纸条的灵敏度
• 5.5 动物试验
• 5.6 临床试验
• 6 结论
• 参考文献
• 致谢