论文摘要
目的:通过利用组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）作用于人胃癌细胞系SGC-7901、MKN-28,研究TSA对人胃癌细胞系SGC-7901和MKN-28细胞生物学行为及其RASSF1A基因表达的影响,初步探讨乙酰化修饰与RASSF1A基因在人胃癌发生中的相关性。方法:将0.1μmol/L、0.3μmol/L、1.0μmol/L、3.0μmol/L、10.0μmol/L不同浓度的TSA分别处理SGC-7901、MKN-28人胃癌细胞系24h、48h、72h,用相差显微镜动态观察药物处理后的两种胃癌细胞形态学改变;MTT比色法检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测细胞周期及凋亡;RT-PCR、Western blotting检测RASSF1A基因mRNA转录和蛋白表达水平变化。设不含细胞组为空白对照组,不加TSA组为阴性对照组。结果:①倒置相差显微镜细胞形态学观察结果显示,未经TSA处理的人胃癌细胞系SGC-7901和MKN-28细胞呈多边形或梭形,细胞致密,甚至堆积为复层。加入TSA后细胞皱缩、变圆,体积变小,排列松散,单层生长,甚至贴壁不良,最后见大多数细胞变圆脱壁飘浮,且随着TSA浓度增高和作用时间延长细胞形态学改变愈加明显。②MTT比色法检测结果显示,TSA处理后人胃癌细胞系SGC-7901、MKN-28细胞增殖受到明显抑制,呈时间和浓度依赖性,与阴性对照组相比,差异具有显著性（ P< 0.05 ）。③流式细胞术检测结果显示,不同浓度TSA作用SGC-7901和MKN-28细胞不同时间后,随着时间的延长和药物浓度的增加,SGC-7901细胞系的凋亡率逐渐增加,与阴性对照组相比,差异具有显著性（ P<0.05 ）;MKN-28细胞系的细胞周期明显改变,滞??G1期的细胞百分率逐渐增高,S期细胞逐渐减少,与阴性对照组相比,差异具有显著性（ P< 0.05 ）。④RT-PCR检测结果显示,人胃癌细胞系SGC-7901、MKN-28无RASSF1A基因mRNA转录,经TSA处理后RASSF1A基因mRNA重新转录,而且随着药物浓度的增加和时间的延长,与阴性对照组相比,差异具有显著性（ P< 0.05 ）。⑤Western blotting检测结果显示,人胃癌细胞系SGC-7901、MKN-28无RASSF1A基因蛋白表达,经TSA处理后蛋白重新表达,而且随着药物浓度的增增加和时间的延长,表达愈强,与阴性对照组相比,差异具有显著性（P< 0.05 ）。结论:TSA抑制人胃癌细胞系SGC-7901、MKN-28细胞增殖,改变人胃癌细胞系MKN-28细胞周期,促进人胃癌细胞系SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与RASSF1A基因异常乙酰化状态恢复导致基因重新表达有关。
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