电针对兔膝骨关节炎软骨细胞MMP-13表达的影响

论文摘要

目的：骨关节炎（osteoarthritis, OA）是一种以关节软骨降解、滑膜炎症为特征的退行性关节疾病,尤以膝关节最易受累,其发病率在人群中呈逐年上升趋势。近年来研究表明,滑膜的炎症反应参与了OA的发生发展过程,基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13, MMP-13）是公认的在滑膜炎症和软骨损伤过程中发挥重要作用的细胞因子,属于基质金属蛋白酶家族（matrix metalloproteinases, MMPs）中的胶原酶亚型。临床治疗中针灸治疗疗效确切,施以疏密波等电刺激,能刺激局部肌肉收缩,改善局部血液循环,促进经气运行,有利于渗出液吸收和关节软骨的修复。本实验通过建立兔膝OA模型,观察治疗前后软骨细胞中MMP-13的表达,探讨电针干预,对OA软骨修复的影响。方法：（1）对象和干预措施：30只新西兰大耳兔随机分为正常组、模型组及电针治疗组3组,每组10只。正常组不造模,模型组和电针治疗组均采用左膝关节伸直位管型石膏固定法,建立OA模型。6周后,模型组采用空气栓塞法处死,取左膝内侧髁软骨观察造模后相关指标变化。电针组选取膝周四个穴位：“梁丘”、“足三里”（后三里）、“血海”、“阳陵泉”。行毫针针刺,疏密波刺激,疏波4Hz、密波20Hz、脉冲宽度0.5ms,每日1次,每次20min,连续治疗10次。同法处死家兔,取股骨内侧髁软骨,观察相关指标变化。（2）观察指标：①肉眼观察正常组、模型组及电针治疗组兔左膝关节大体形态变化；②切取左膝关节股骨内侧髁软骨,10%中性甲醛溶液固定后,石蜡包埋、切片,作HE染色和甲苯胺蓝染色光镜观察软骨细胞形态,按Mankin’s评分标准对软骨大体形态和光镜观察结果进行评分。③免疫组织化学分析：用兔抗MMP-13试剂盒检测左膝关节内侧髁软骨MMP-13的表达变化。（3）统计学处理：所有数据以均数±标准差表示,采用SPSS13.0统计软件对数据进行统计分析,P<0.05表示差异有显著意义。结果：（1）软骨大体观察：正常组左膝关节无明显关节积液,软骨面外观光滑呈蓝白色,色深明亮,无裂纹。模型组左膝关节大部分出现关节积液,所有软骨表面呈灰黄色,光泽度降低,关节面粗糙,部分部位出现糜烂；电针治疗组部分动物出现关节积液及滑膜增生,软骨改变以粗糙为主,但程度较轻,未见明显糜烂；电针治疗组与模型组按Mankin’s评分比较软骨结构,有显著性差异（P<0.01）。（2）HE染色及甲苯胺蓝染色病理学观察：正常组示软骨表面平整,软骨层厚薄均匀；软骨细胞排列整齐,细胞大小一致；甲苯胺蓝染色均匀,无基质失染。模型组示软骨表层出现溃烂缺失,软骨层厚度明显变薄,软骨细胞大量减少,排列紊乱；甲苯胺蓝染色弱,偶有基质失染。电针治疗组软骨表面较规则,裂隙少,软骨细胞排列较整齐,软骨层厚度较模型组厚,软骨细胞数较模型组明显增多；甲苯胺蓝染色弱。按Mankin’s评分正常组与模型组、模型组与电针治疗组间比较,差异均有显著意义（P<0.01）。（3）免疫组化MMP-13测定：正常组软骨细胞内无MMP-13表达；模型组的软骨基质、胞浆中均有MMP-13表达,全层可见,尤以表、中层密度最高,成熟软骨细胞中较多,为深棕褐色颗粒；电针治疗组中,软骨表层可见散在的软骨细胞胞浆中存在MMP-13表达,为浅棕褐色颗粒。正常组与模型组、模型组与电针治疗组间比较,差异均有显著意义（P<0.05）。结论：电针治疗可减少兔OA软骨细胞中MMP-13表达,促使软骨细胞重排,对OA有积极的治疗作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 英汉缩略词对照表
• 致谢
• 综述
• 参考文献
• 附言