土壤中群体感应抑制菌的筛选及其抑制效果的研究

论文摘要

随着抗菌药物的广泛应用,细菌的耐药性已成为全球关注的重大难题,因此,寻找治疗细菌感染途径已成为当今研究的前沿和热点。近年来,细菌群体感应（quorum sensing）研究的发展,给我们带来了新的机遇和挑战。研究表明,缺失了群体感应系统的致病菌株其致病能力大大降低,因此筛选高效的群体感应抑制剂有望成为解决抗药性问题的一个有效途径。对于条件致病菌铜绿假单胞菌,其多种毒力因子和次级代谢产物受群体感应系统的调控。在铜绿假单胞菌中有两种主要的群体感应系统：1as系统和rh1系统。群体感应系统的发现引发了从天然和化学途径中筛选群体感应抑制剂的研究兴趣。本文以铜绿假单胞菌的rjl群体感应系统为靶标,从土壤中筛选具有群体感应抑制效果的微生物。本课题利用CV026检测菌株建立了一种高灵敏度群体感应抑制筛选模型,在群体感应信号分子C4-HSL存在下,通过平板法直接可视化筛选抑制菌株,初步筛选得到56株细菌具铜绿假单胞菌群体感应抑制活性,进一步复筛得到了16株细菌提取物具有群体感应抑制作用,且在有效浓度范围内对细菌生长没有影响。经16sRNA初步鉴定其中有显著效果的一个菌株为Pseudomonas属。研究表明,该提取物能够显著降低铜绿假单胞杆菌多项毒力因子的表达,包括绿脓菌素,鼠李糖脂,弹性蛋白酶和总蛋白酶,并具有剂量依赖性。本课题对新型抗菌药物的研究和开发具有重要意义。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 细菌群体感应
• 1.2 铜绿假单胞菌中群体感应研究现状
• 1.2.1 铜绿假单胞菌致病性及毒力因子
• 1.2.2 铜绿假单胞菌的耐药机制
• 1.2.3 铜绿假单胞菌中群体感应系统
• 1.3 干扰细菌群体感应
• 1.3.1 抑制信号分子生成
• 1.3.2 信号分子的降解
• 1.3.3 干扰信号分子接收
• 1.4 研究的目的和意义
• 2 群体感应抑制菌的筛选
• 2.1 材料
• 2.1.1 试验菌株
• 2.1.2 培养基的配置和生长条件
• 2.1.3 主要试剂
• 2.1.4 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 样品采集
• 2.2.2 微生物分离
• 2.2.3 群体感应抑制菌的初筛选
• 2.2.4 抑制菌提取物的制备
• 2.2.5 群体感应抑制活性的复筛
• 2.3 实验结果
• 2.3.1 样品收集
• 2.3.2 群体感应抑制活性的初筛选
• 2.3.3 群体感应抑制活性的复筛
• 3 菌株4001对铜绿假单胞菌抑制效果的研究
• 3.1 材料
• 3.1.2 培养基的配置和生长条件
• 3.1.3 主要试剂
• 3.1.4 主要仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 菌株鉴定
• 3.2.2 菌液提取物的纯化
• 3.2.3 菌液提取物对铜绿假单胞菌生长的影响
• 3.2.4 菌液提取物对毒力因子的影响
• 3.2.5 菌液提取物对生物膜的影响
• 3.3 实验结果
• 3.3.1 菌株鉴定
• 3.3.2 产物的提取和纯化
• 3.3.3 提取物对细胞生长无明显影响
• 3.3.4 提取物对毒力因子的抑制作用
• 3.3.5 提取物对于生物膜形成无明显影响
• 4 讨论
• 5 论文总结
• 参考文献
• 致谢