人参叶皂苷生物转化的研究

论文摘要

本论文首先以人参叶总皂苷为原料,用AB-8大孔吸附树脂对PPD和PPT进行分离;并用硅胶柱层析法分离人参叶皂苷PPD制备单体F2;然后用人参皂苷Ⅰ型酶水解F2和Rd生成C-K,并比较了水解效率;再以Rb1为底物,探究了在人参皂苷Ⅱ型酶作用下转化生成C-K的最佳条件;最后研究了人参自身提取物对叶皂苷PPD的水解作用。以两种不同浓度的乙醇为洗脱液,利用AB-8大孔吸附树脂对分离人参叶皂苷的PPD和PPT进行分离,低浓度乙醇（36%）洗脱液中主要成分是Re和Rg1,也有少量Rd、F2等二醇类皂苷;高浓度乙醇（60%）洗脱下来的组分主要为Rd,F2等二醇类皂苷,并带有少量Rg1,无Re。50g人参叶PPD经硅胶柱层析分离,可得到10g人参皂苷F2,得率为20%,纯度93.01%。分别以单体皂苷F2、Rd为底物,利用人参皂苷Ⅰ型酶进行转化,都可以生成稀有人参皂苷C-K。sp.48菌经诱导发酵产生的人参皂苷Ⅰ型酶可水解Rb1生成C-K,整个转化过程为:Rb1→Rd→F2→C-K。通过对转化条件的优化,发现该酶液在60℃与1%的底物Rb1反应3-4h,生成C-K的转化率最高;人参自身酶等提取物,可以水解人参叶皂苷PPD,产物以Rg3为主,也有少量Rh2生成。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1.1 人参简介
• 1.2 人参叶
• 1.2.1 人参叶的性状
• 1.2.2 人参叶的化学成分
• 1.2.3 人参皂苷的分类及结构
• 1.2.3.1 人参二醇类皂苷
• 1.2.3.2 人参三醇类皂苷
• 1.2.3.3 齐墩果酸皂苷
• 1.2.4 人参皂苷的理化性质
• 1.2.5 人参皂苷的药理作用
• 1.2.6 人参皂苷的分离纯化方法
• 1.2.6.1 大孔吸附树脂分离法
• 1.2.6.2 硅胶柱层析分离法
• 1.2.7 人参皂苷的检测方法
• 1.2.7.1 薄层层析法（TLC）
• 1.2.7.2 高效液相色谱法（HPLC）
• 1.3 人参皂苷的转化
• 1.3.1 化学转化
• 1.3.2 生物转化
• 1.4 本论文的主要研究内容
• 第二章 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 材料与试剂
• 2.1.2 实验设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 AB-8分离人参叶皂苷的中的PPD和PPT
• 2.2.2 D-296大孔吸附树脂对人参叶皂苷脱色
• 2单体'>2.2.3 硅胶柱层析法分离叶皂苷中的皂苷F₂单体
• 2.2.4 人参叶皂苷的生物酶转化
• 2和Rd、与人参皂苷酶Ⅰ反应生成C-K'>2.2.4.1 人参叶皂苷F₂和Rd、与人参皂苷酶Ⅰ反应生成C-K
• 1经人参皂苷Ⅰ型酶转化的研究'>2.2.5 人参皂苷Rb₁经人参皂苷Ⅰ型酶转化的研究
• 2.2.5.1 菌种培养
• 2.2.5.2 酶液提取
• 2.2.5.3 产酶菌的选择
• 2.2.5.4 最佳酶转化温度的研究
• 2.2.5.5 最佳酶转化时间和最佳底物浓度的研究
• 3'>2.2.6 人参叶皂苷生物法制备人参皂苷Rg₃
• 2.2.6.1 人参自身酶等提取物转化人参叶PPD实验
• 2.2.6.2 人参自身酶等提取物转化人参叶PPD、Re和PPT
• 2.2.7 人参皂苷的检测
• 2.2.7.1 薄层层析（TLC）法检测
• 2.2.7.2 高效液相色谱（HPLC）法检测
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 AB-8大孔吸附树脂分离人参叶皂苷中PPD和PPT
• 2'>3.2 硅胶柱分离人参叶皂苷中F₂
• 2和RD为C-K'>3.3 人参皂苷Ⅰ型酶转化F₂和RD为C-K
• 3.4 人参皂苷Ⅰ型酶转化RB1为C-K
• 3.4.1 产酶菌及诱导物的确定
• 3.4.2 酶反应温度的确定
• 3.4.3 最佳底物浓度和酶转化时间
• 3'>3.5 人参叶皂苷转化为RG₃
• 3.5.1 人参提取物对PPD的水解实验
• 3.5.2 人参自身酶水解不同种类人参叶皂苷的比较
• 第四章 结论
• 参考文献
• 致谢