论文摘要
活血化瘀类药常用于糖尿病慢性并发症防治，随着该类药物临床广泛应用，人们不断加强对其作用规律及物质基础方面探索性研究。本课题来源于国家中医药管理局专项课题：活血化瘀类药多途径干预糖尿病慢性并发症形成作用研究（课题编号：06～07ZP32），借助不同动物模型观察活血化瘀药虎杖主要成分虎杖总蒽醌对糖尿病肾病早期干预作用。目的：通过研究虎杖总蒽醌对不同高血糖模型及糖尿病肾病模型的影响，观察虎杖总蒽醌对糖尿病肾病早期干预作用，并初步探讨其作用机理。方法：动物模型：分别选用肾上腺素，四氧嘧啶诱发不同高血糖小鼠模型，并运用链脲佐菌素诱发NH小鼠糖尿病肾病模型，SD大鼠糖尿病肾病及其血瘀模型。动物分组：各实验，动物均分为6组（空白组、模型组、阳性对照组、虎杖总蒽醌大、中、小剂量组）。观察虎杖总蒽醌降糖作用采用二甲双胍做为阳性对照药物，观察虎杖总蒽醌对肾脏的保护作用采用开搏通做为阳性对照药物。指标选择：选用BG、BUN、Chol、HDL、TC、LDL及AGEs、RAGE、TGF-β1、Smads等为观察指标。指标测定：运用全自动生化仪测定各血生化指标，放免法测定尿微量白蛋白值，荧光分光光度计法检测定肾皮质AGEs荧光值，免疫组化法结合MetaMorph图像分析软件等工具观察并分析RAGE、TGF-β1、Smads蛋白表达情况。运用光镜观察肾组织形态变化。结果：1对肾上腺素高血糖模型影响①与模型组比较，在30min、60min不同时间点，二甲双胍能显著降低模型动物血糖水平（P﹤0.01）。大、中、小剂量虎杖总蒽醌也能够明显降低模型动物血糖水平（P﹤0.05）；②虎杖总蒽醌大、中、小剂量组在30min、60min不同时间点血糖水平无显著差异（P﹥0.05）。二甲双胍组血糖水平与虎杖总蒽醌大、中、小剂量组血糖水平有显著差异（P﹤0.01），提示二甲双胍对肾上腺素所致高血糖模型降糖效果优于虎杖总蒽醌。③且中剂量虎杖总蒽醌还可显著升高肝糖原水平（P﹤0.05），大剂量虎杖总蒽醌有升高肝糖原的趋势，但无统计学意义（P﹥0.05）。2对四氧嘧啶高血糖小鼠模型影响①与空白对照组比较，模型组血糖显著升高（P﹤0.01），肝糖原水平显著降低（P﹤0.01），说明实验造模成功；②与模型组比较，大、中剂量虎杖总蒽醌和二甲双胍都能显著降低四氧嘧啶所致的高血糖水平，具有显著性差异；③与模型组比大、中剂量虎杖总蒽醌可显著升高肝糖原水平（P﹤0.01）。3对糖尿病肾病模型NH小鼠肾脏保护作用①虎杖总蒽醌对DN模型一般情况如饮水量、进食量增加以及体重减轻等情况具有改善作用趋势；②大、中、小剂量虎杖总蒽醌均能显著降低肾脏指数，具有统计学意义（P<0.05）；③大剂量虎杖蒽醌能够显著降低血尿素氮水平（p﹤0.05）。中剂量虎杖总蒽醌能更加明显降低尿素氮水平（p﹤0.01）。大、中剂量虎杖总蒽醌能显著降低血肌酐水平（p﹤0.05）；④与模型组比较，给药4周后不同剂量虎杖总蒽醌均能显著降低DN高血糖水平，具有显著性差异；⑤大、中剂量虎杖总蒽醌能显著降低CHOL水平（p﹤0.05）。大剂量虎杖总蒽醌能显著降低TG水平（p﹤0.05）。中剂量虎杖总蒽醌降低TG水平更加明显（p﹤0.01）。虎杖总蒽醌大、中剂量组对HDL水平有升高趋势，同时对LDL水平有降低趋势，但无统计学意义（p﹥0.05）。小剂量虎杖总蒽醌及开搏通有降低CHOL、TG、LDL水平趋势，同时HDL有下降趋势，但无统计学意义（p﹥0.05）。4对糖尿病肾病模型NH小鼠肾皮质AGEs、RAGE影响①模型组NH小鼠肾皮质AGEs水平明显升高，而大、中剂量虎杖总蒽醌与开搏通组肾皮质AGEs水平明显下降，差异具有显著性；②模型组NH小鼠肾脏皮质RAGE的表达显著高于空白组对照组，而虎杖总蒽醌大、中剂量组较模型组显著降低（p﹤0.05）。5对NH小鼠糖尿病肾病模型肾TGF-β1、SMAD3影响DN模型NH小鼠肾皮质TGF-β1、Smad3蛋白表达水平明显升高，与模型组比较，虎杖总蒽醌大、中、小剂量组及开搏通组TGF-β1水平无显著差异。虎杖总蒽醌中剂量组与开搏通组NH小鼠肾皮质Smad3蛋白表达水平明显下降（p﹤0.05）。6对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用①虎杖总蒽醌对DN模型饮水量、进食量增加以及体重减轻等情况具有改善作用，对尿量增加无明显影响；②不同剂量虎杖总蒽醌均能显著降低肾脏指数，具有统计学意义（P<0.01）；大、中剂量虎杖总蒽醌在用药第8周能明显减少DN模型大鼠尿白蛋白量（p﹤0.05）。小剂量虎杖总蒽醌有减少DN模型大鼠尿白蛋白量的趋势，但无统计学意义（p﹥0.05）；③给药4周后大、中剂量虎杖总蒽醌均能显著降低DN高血糖水平（p﹤0.05）。④开搏通及大、中、小剂量虎杖蒽醌在用药第8周能明显降低DN模型大鼠血肌酐水平（p﹤0.01）,又能降低尿素氮水平（p﹤0.05）。7对糖尿病肾病血瘀模型脂代谢及血流变学影响①虎杖总蒽醌不同剂量能减轻血瘀模型大鼠全血粘度、血浆粘度作用（p﹤0.05），中剂量虎杖总蒽醌对血浆粘度减轻明显（p﹤0.01）；②与模型组比较，大、中剂量虎杖总蒽醌能明显降低TG水平（p﹤0.05）。大剂量虎杖总蒽醌能明显降低LDL水平（p﹤0.05）。中剂量虎杖总蒽醌有降低LDL水平趋势，但无统计学意义（p﹥0.05）。结论：1虎杖总蒽醌对糖尿病肾病肾脏具有保护作用，其作用机制可能为：①降低血糖、甘油三酯等水平，有效调节机体代谢紊乱；②减少尿白蛋白排泄量，降低血肌酐、尿素氮水平，保护肾功能；③抑制AGEs、RAGE及Smad3水平异常升高，防止肾小球硬化；④降低全血与血浆粘度，改善微循环。2虎杖总蒽醌为虎杖防治糖尿病肾病物质基础之一。