乳腺良恶性肿瘤病人乳腺组织MUC1和血清MUC1 VNTR核心肽抗体检测及意义

论文摘要

MUC1是在许多正常粘膜上皮低表达,在多种恶性肿瘤组织高表达的跨膜糖蛋白。近年它已成为肿瘤特异性免疫治疗的靶点。组织MUC1检测可作为监测恶性肿瘤病情及预后的指标。对血清MUC1数目不同的连续重复序列(variable number tandemrepeats, VNTR)核心肽抗体检测方法的探讨可为靶向MUC1肿瘤生物疫苗研发提供有力的监测工具,该抗体的高水平可成为估计恶性肿瘤病人预后良好的指标。目前检测该抗体主要是以合成肽为抗原,尚未见以重组蛋白为抗原的间接ELISA法检测的报道。本研究发现MUC1在乳癌、乳腺良性肿瘤和癌旁正常乳腺组织中均有不同强度和部位的表达。鉴于重组蛋白成本低、易于包被、易于推广使用的优点,本研究采用基因重组法等获得MUC1 VNTR核心肽重组蛋白,建立了以该蛋白为抗原的具有高特异性及灵敏性的人血清MUC1VNTR核心肽抗体间接ELISA检测法。对总共186例血清样本检测表明乳腺良性肿瘤病人该IgG抗体的阳性率高于乳癌(主要治疗之前或之后)患者和健康妇女,检测结果还提示该抗体在乳癌发生、发展中对血清MUC1 VNTR核心肽抗原的中和作用。总之,本研究为MUC1抗原和MUC1 VNTR核心肽抗体在乳癌中的医学应用和作用机制提供了一些材料和依据。

论文目录

• 英文缩写词表
• 前言
• 第一章 文献回顾
• 一、MUC1 的研究现状
• 1. Mucins 家族简述
• 2. MUC1 的生物学特性
• 3. 医学应用
• 4. 组织MUC1 表达检测
• 二、人血清MUC1 VNTR 核心肽抗体的研究现状
• 1. 发现与检测
• 2. 生物学作用
• 3. 医学应用
• 第二章 材料与方法
• 一、材料
• 1. 8R-MUC1 VNTR 核心肽重组蛋白的基因构建、原核表达及纯化
• 2. MUC1 VNTR 核心肽多克隆抗体的制备及鉴定
• 3. 人乳腺肿瘤组织MUC1 VNTR 核心肽抗原检测
• 4. 检测人血清MUC1 VNTR 核心肽抗体间接ELISA 方法的建立
• 二、主要方法
• 1. 8R-MUC1 VNTR 核心肽融合蛋白的基因构建、原核表达及纯化
• 2. MUC1 VNTR 核心肽多克隆抗体的制备及鉴定
• 3. 人乳腺肿瘤组织MUC1 VNTR 核心肽抗原检测
• 4. 检测人血清MUC1 VNTR 核心肽抗体间接ELISA 方法的建立
• 第三章 结果
• 一、8R-MUCPT 融合蛋白的基因构建、原核表达及纯化
• +-8R-MUCPT 重组质粒的获得及序列测定'>1. pET26b⁺-8R-MUCPT 重组质粒的获得及序列测定
• 2. 8R-MUCPT 重组蛋白的表达、纯化和鉴定
• 二、MUC1 VNTR 核心肽多克隆抗体的制备及鉴定
• 1. MUC1 VNTR 核心肽多克隆抗体效价
• 2. 用Western blot 分析MUC1 VNTR 核心肽多克隆抗体的特异性
• 3. 用ELISA 阻断试验检测 MUC1 VNTR 核心肽多克隆抗体特异性
• 三、乳腺肿瘤组织MUC1 VNTR 核心肽抗原检测
• 1. 采用MUC1 VNTR 核心肽单克隆抗体进行的SP 法组化检测
• 2. 采用MUC1 VNTR 核心肽多克隆抗体做为一抗的SP 法组化检测.
• 四、检测人血清MUC1 VNTR 核心肽抗体间接ELISA 方法的建立
• 1. 特异性检测
• 2. 间接ELISA 实验
• 3. 敏感性和特异性
• 4. 恶性肿瘤患者血清CA15-3 抗原和MUC1 VNTR 核心肽抗体的关系
• 图表与照片
• 第四章 讨论
• 一、8R-MUCPT 重组蛋白的原核表达及纯化
• 二、MUC1 VNTR 核心肽多克隆抗体的制备及鉴定
• 三、人乳腺肿瘤组织MUC1 VNTR 核心肽抗原检测
• 四、检测人血清MUC1 VNTR 核心肽抗体间接ELISA 方法的建立
• 1. 特异性测定
• 2. 间接ELISA 竞争抑制实验
• 3. 检测人血清MUC1 VNTR 核心肽抗体间接ELISA 方法的建立
• 小结
• 参考文献
• 攻读博士期间发表论文情况
• 摘要
• ABSTRACT
• 致谢