论文题目: 羟基喜树碱隐形纳米囊泡肿瘤靶向研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 药剂学
作者: 施斌
导师: 裴元英
关键词: 羟基喜树碱,囊泡,固有水化层厚度,链密度,药物动力学,体内分布,肿瘤靶向,血浆蛋白吸附,免疫印迹,巨噬细胞吞噬,补体消耗,体内外相关
文献来源: 复旦大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本文合成了三种PEG分子量的聚乙二醇化聚十六烷基氰基丙烯酸酯(PEG-PHDCA)作为表面修饰材料,选用小分子药物羟基喜树碱为模型药物,制备了隐形纳米囊泡,对其组装机理、药物与膜材的相互作用进行系统的研究和论证;系统的考察了该类囊泡的理化特性(粒径、MePEG分子量、表面电位、固有水化层厚度、PEG嵌入脂质双层的效率、PEG链的表面密度)与其体外牛物学指标(血浆蛋白吸附、补体消耗、巨噬细胞吞噬)、体内药动学、药效学和分布参数之间的关系,以闸明了该类囊泡长循环和肿瘤靶向规律。 首先,合成了PEG分予量为2000、5000、10000的PEG-PHDCA,测定了共聚物的溶血性、临界胶束浓度。建立了羟基喜树碱的HPLC分析方法,测定了羟基喜树碱(HCPT)在水和正辛醇中的表观溶解度以及正辛醇/水的表观分配系数,考察了不同pH值条件下羟基喜树碱的表观开环平衡常数,为设计处方、确定工艺条件及建立体内分析方法提供依据。 以PEG-PHDCA、司盘、胆固醇为载体材料,采用薄膜分散-水化超声法制备了HCPT囊泡,以粒径、包封率、载药量为指标,在单因素考察的基础上,通过正交设计实验,优化HCPT囊泡处方和工艺,制备了三种粒径的PEG5000-PHDCA囊泡(80nm、150nm、210nm左右)和三种PEG分予量修饰(PEG Mr2000、5000、10000)的PEG-PHDCA囊泡。制备了80nm左右的PHDCA囊泡作为对照品。为提高囊泡的稳定性,进一步优化冻干保护剂,制备了不同囊泡的冻干品。 对HCPT囊泡的理化性质进行了系统的考察。结果发现,冻干品水化后电子显微镜下囊泡呈圆形,大小比较均匀,边缘光滑。随着PEG分子量的增加,Zeta电位接近0,固有水化层(FALT)变厚,但同时PEG嵌入脂质双层的效率下降,PEG链的表面密度(δ)变小,两个相邻PEG链间的距离D变大(p<0.05)。随粒径的增大,Zeta电位的代数值略变小,FALT略变薄(p>0.05),PEG链的表面密度δ变小,两个相邻PEG链间的距离D变大(p<0.05)。80%以上的HCPT在囊泡中以内酯环形式存在。体外释放试验结果表明,PEG修饰的囊泡释药快于PHDCA囊泡,且随PEG分子量的增大和粒径的减小,释药加快;体外释药符合一级动力学、Higuchi方程和Hixon-Crowell模型,释药机理为Fickian扩散。 膜组装研究表明,span的CPP值大于0.5,可形成具有双分子层的囊泡。差示量热分析(DSC)和X射线衍射(XRD)表明,HCPT与膜材发生一定的相互作用。~1H-NMR证明HCPT与span形成氢键,表面用PEG-PHDCA修饰后,氢键作用仍然存在,氢键作用解释了HCPT熔点升高的现象。囊泡的载药是亲脂作用力和氢键作用力共同作用的结果。 纳米囊泡体外生物学评价结果表明,PEG修饰对囊泡有明显的保护作用,与PHDCA囊泡相比可显著减少血浆蛋白吸附,补体消耗和巨噬细胞吞噬;在不同粒
论文目录:
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英文摘要
前言
第一部分 聚乙二醇化聚十六烷基氰基丙烯酸酯的合成和表征
1 材料和方法
1.1 材料与仪器
1.2 聚乙二醇氰基乙酸酯(PEGCA)的合成
1.3 十六烷基氰基乙酸酯(HDCA)的合成
1.4 聚乙二醇化聚十六烷基氰基丙烯酸酯的合成
1.5 PEG-PHDCA的结构鉴定
1.6 PEG-PHDCA的分子量测定
1.7 PEG-PHDCA的DSC测定
1.8 PEG-PHDCA的溶血性测定
1.9 PEG-PHDCA的临界胶束浓度(CMC)测定
2 结果与讨论
2.1 聚乙二醇氰基乙酸酯和十六烷基氰基乙酸酯的合成
2.2 PEG-PHDCA的合成和表征
2.3 PEG-PHDCA的差示量热分析
2.4 PEG-PHDCA的溶血性
2.5 PEG-PHDCA的CMC值
3 小结
附图
第二部分 羟基喜树碱纳米囊泡处方前研究
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2 HCPT含量测定方法
1.3 HCPT在蒸馏水和正辛醇中的表观溶解度
1.4 HCPT在正辛醇/水中的表观分配系数
1.5 HCPT在不同pH条件下表观开环平衡常数
2 结果与讨论
2.1 HPLC法含量测定方法
2.2 HCPT在蒸馏水、正辛醇中的表观溶解度和正辛醇/水表观分配系数
2.3 HCPT在不同pH条件下表观开环平衡常数
3 小结
第三部分.羟基喜树碱隐形纳米囊泡的处方设计和制备工艺研究
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2 HCPT纳米囊泡的制备
1.3 单因素考察
1.4 正交设计优化处方
1.5 囊泡的粒径、载药量和包封率测定
1.6 冻干工艺
2.结果与讨论
2.1 载药量和包封率测定方法的评价
2.2 单因素考察
2.3.正交设计优选处方和制备工艺
2.4 冷冻干燥工艺
3 小结
第四部分 羟基喜树碱纳米囊泡的理化性质的研究
1.材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2 形态、粒径、载药量和包封率
1.3 Zeta电位、固有水化层厚度(FALT)
1.4 PEG链的表面密度(δ)
1.5 HCPT的开环百分率
1.6 体外释放实验
1.7 统计分析
2 结果与讨论
2.1 形态和粒径
2.2 载药量和包封率
2.2 Zeta电位
2.3 固有水化层厚度(FALT)
2.4 PEG链嵌入脂质双层的效率
2.5 PEG链的表面密度
2.6 HCPT开环百分率
2.7 体外释放试验
3 小结
第五部分 羟基喜树碱纳米囊泡的组装机理和包封机理研究
1.材料和方法
1.1 材料与仪器
1.2 几何排列参数测定
1.3 HCPT与膜材的相互作用
1.3.1 差示扫描量热分析
1.3.2 X射线衍射分析
1.3.3 ~1H-NMR分析
2 方法和结果
2.1 几何排列参数
2.2 HCPT与膜材的相互作用
2.2.1 差示量热分析
2.2.2 X射线衍射
2.2.3 ~1H-NMR分析
3.小结
第六部分 羟基喜树碱纳米囊泡的体外生物学评价
1 材料和方法
1.1 材料与仪器
1.2 动物
1.3 小鼠血清蛋白吸附聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析
1.4 小鼠血清蛋白吸附后免疫印迹检测(Western Blot)分析
1.5 补体消耗试验
1.6 巨噬细胞吞噬试验
1.7 统计学分析
2 结果与讨论
2.1 血浆蛋白吸附试验
2.2 Western-blot试验
2.3 补体消耗试验
2.4 巨噬细胞吞噬实验
3 小结
第七部分 羟基喜树碱纳米囊泡的体内生物学评价——大鼠体内药动学、S180实体瘤小鼠体内分布和抗肿瘤活性
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
1.2 动物
1.3 HCPT大鼠血浆浓度测定方法
1.4 纳米囊泡大鼠体内药动学试验
1.5 纳米囊泡S180实体瘤小鼠体内分布试验
1.6 对荷S180瘤小鼠的抑瘤实验
1.7 统计学分析
2 结果与讨论
2.1 囊泡在SD大鼠体内的药物动力学实验
2.2 纳米囊泡大鼠体内的药动学
2.3 纳米囊泡在S180实体瘤小鼠体内分布
2.4.抗肿瘤药效实验
3 小结
第八部分 纳米囊泡体内外相关性分析
1 方法
2 结果与讨论
2.1 PEG分子量对囊泡体内外行为的影响
2.2 粒径对其体内外行为的影响
2.3 体外生物学指标与其体内行为的相关性
2.4 体内药动学参数与其肿瘤靶向指标和药效指标的相关性
3.小结
全文结论
论文创新点和发表论文
参考文献
综述
致谢
发布时间: 2005-09-19
参考文献
- [1].羟基喜树碱用于放射增敏治疗局部晚期非小细胞肺癌的临床研究[D]. 张玉田.河北医科大学2006
- [2].羟基喜树碱脂质体抑制肝癌介入栓塞后缺氧应答的实验研究[D]. 熊付.华中科技大学2013
- [3].羟基喜树碱治疗神经母细胞瘤的研究[D]. 袁哲锋.浙江大学2009
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- [4].抗肿瘤药雷替曲塞的脑靶向给药系统研究[D]. 王东兴.中国人民解放军军事医学科学院2005
- [5].基于含Carbopol~(?)的超多孔水凝胶复合物(SPHCc)载体的胰岛素新型口服给药系统研究[D]. 唐翠.复旦大学2005
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