肿瘤细胞阿霉素转运动力学模型研究

论文摘要

肿瘤细胞多药耐药（Multidrug Resistance,MDR）是肿瘤细胞同时对多种结构和作用机制的药物产生交叉耐药,是恶性肿瘤治疗的一大障碍。现有研究多是从基因、蛋白等分子水平进行研究,但是一直没有解决这个难题。在国外,肿瘤细胞化疗药物转运动力学研究逐渐引起关注;在国内,中药逆转MDR研究进展很快,已发现很多具有逆转活性的中药成分。为了揭示中药逆转剂的逆转机制,寻找评价逆转剂逆转效果的新方法,本文对K562/A细胞阿霉素（Doxorubicin,Dox）转运动力学模型,以及中药逆转剂的逆转效果与动力学参数之间内在联系进行了探索性研究。建立动力学模型的前提条件是可以同时测定任意时刻肿瘤细胞内外的浓度,因此,本文首先建立了K562/A细胞内外Dox浓度的反相高效液相色谱-荧光测定法。该方法简单、准确、线性范围宽、检测限低,精密度和回收率良好,可用于研究肿瘤细胞内外Dox浓度的动态变化规律。然后,建立了K562细胞和K562/A细胞Dox转运动力学的机理模型和经验模型。针对K562/A细胞,以维拉帕米（Verapamil,VRP）为对照,考察了逆转剂川芎嗪（Tetramethylpyrazine,TMP）、TMP-VRP、丹皮酚（Paeonol,Pae）、槲皮素（Quercetin,Que）、四物合剂（SW）、参麦注射液（SM）对动力学模型参数的影响,发现所选逆转剂都可以不同程度增加细胞膜对Dox的通透性;其中逆转剂VRP、Pae、Que、SW、WM和VRP-TMP可不同程度降低Pgp介导的Dox外排作用;TMP与VRP具有协同作用,因此,动力学模型可以用于研究中药逆转肿瘤细胞MDR机制。最后,采用MTT法测定上述逆转剂的逆转倍数RI。通过回归分析研究中药逆转剂的动力学参数R与逆转倍数RI间关系,发现1/（R+1） 与RI之间具有线性相关关系;同时,理论证明R和Cin以及RI密切相关,动力学参数R用于评价逆转效果和筛选逆转剂具有一定合理性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第1章 绪论
• 1. 1 肿瘤细胞MDR研究
• 1. 1. 1 肿瘤细胞MDR机制
• 1. 1. 2 逆转肿瘤细胞MDR的研究进展
• 1. 1. 3 中药逆转MDR的研究
• 1. 2 肿瘤细胞化疗药物转运动力学模型研究
• 1. 2. 1 单室模型与四室模型
• 1. 2. 2 动力学模型的应用
• 1. 2. 3 国内关于肿瘤细胞化疗药物转运动力学的研究
• 1. 2. 4 小结
• 1. 3 体外逆转MDR药物敏感实验方法
• 1. 4 肿瘤细胞内外Dox浓度测定方法
• 1. 5 研究工作简介及创新点
• 第2章 肿瘤细胞内外Dox浓度测定法
• 2. 1 实验部分
• 2. 2 结果与讨论
• 2. 3 结论
• 第3章 肿瘤细胞Dox转运动力学模型研究
• 3. 1 实验方法
• 3. 2 肿瘤细胞动力学模型的理论研究
• 3. 2. 1 基于PgP假说的机理模型
• 3. 2. 2 基于二次回归分析的经验模型
• 3. 3 结果
• 3. 3. 1 基于PgP假说的机理模型
• 3. 3. 2 基于二次回归分析的经验模型
• 3. 4 讨论
• 3. 4. 1 中药逆转剂逆转K562／A细胞MDR
• 3. 4. 2 机理模型与经验模型的异同点
• 第4章 动力学参数与药理指标间关系研究
• 4. 1 实验方法
• 4. 2 动力学参数与逆转倍数间关系的理论研究
• 4. 3 结果
• 4. 3. 1 耐药倍数和逆转倍数
• 4. 3. 2 动力学参数与逆转倍数间关系
• 4. 4 讨论
• 4. 4. 1 关于各逆转剂逆转倍数的讨论
• 4. 4. 2 关于动力学参数、Dox浓度和逆转倍数间关系的讨论
• 第5章 总结与展望
• 5. 1 总结
• 5. 2 展望
• 致谢
• 附录