新生期肌肉注射GLP-1质粒影响青年大鼠行为和海马GR表达

论文摘要

本研究在大鼠出生后发育的关键窗口期（第2天）肌肉注射GLP-1质粒,在大鼠达到青年期性成熟时（54天）采用高架十字迷宫法检测了青年大鼠的焦虑样行为,8周龄（56天）时屠宰采集血浆、肾上腺、海马,肾上腺称重、并计算肾上腺指数。采用酶免法（EIA）测定血浆皮质酮含量,用实时定量RT-PCR（real time RT-PCR）方法检测海马GR、DNMT1、GLP-1R、NGFI-A基因mRNA表达,用Western blot方法检测海马GR和DNMT1蛋白表达,最后用亚硫酸氢盐测序法（BsP）检测GR启动子exon 17的甲基化水平,以揭示GLP-1调控海马GR表达、进而程序化影响青年大鼠行为的分子机制。1青年大鼠焦虑样行为检测高架十字迷宫（elevated plus maze,EPM）结果表明注射GLP-1质粒（GLP-1Plasmid,GP）的大鼠进入开臂的次数（OE%,P=.024）和在开臂待的时间（OT%,P=.021）都显著高于注射空白质粒（Vacant Plasmid,VP）的大鼠,表现明显的抗焦虑样行为;然而,GP组大鼠进入开臂和闭臂的总次数（OE+CE,P=.011）显著低于VP组大鼠,表明其运动活力显著下降。2肾上腺指数和血浆皮质酮检测两组大鼠肾上腺指数未表现有显著差异（P=.172）。酶免法（enzymeimmunoassay,EIA）测定皮质酮结果表明,GP组大鼠血浆皮质酮水平有所提高,但差异也不显著（P=.42）。3海马GR mRNA和蛋白表达鉴于海马GR在动物焦虑样行为中起着重要的调节作用,本实验检测了海马GRmRNA和蛋白水平。GP组大鼠海马GRmRNA表达显著高于VP组大鼠（P=.01）,GR蛋白表现升高的趋势（P=.119）。4海马DNMT1 mRNA和蛋白表达为分析GP组海马GR表达上调是否与DNA甲基化有关,本实验检测了大鼠海马DNMT1表述,发现GP组海马DNMT1 mRNA（P=.024）和蛋白水平（P=.009）均显著低于VP组大鼠。提示DNA甲基化可能参与GR转录调控。5海马GR启动子DNA甲基化水平检测提取GP组和VP组大鼠海马基因组DNA后,采用亚硫酸氢盐测序法检测GR exon17启动子区域甲基化水平,克隆测序结果表明在转录因子NGFI-A结合的两个CpG位点均没有甲基化,其他15个CpG位点也只有零星的甲基化。提示GR exon 17启动子区域DNA甲基化可能不参与GLP-1导致的GR转录上调。6海马GLP-1R和NGFI-A mRNA表达GP组大鼠GLP-lR（P=.009）和NGFI-A（P=.001）表达均显著高于VP组,表明肌肉注射GLP-1可能通过作用于其海马受体提高NGFI-A表达,进而调控GR表达。综上,新生期肌肉注射GLP-1质粒可能通过其海马受体介导,诱导GR转录因子NGFI-A表达上调,从而程序化调控海马GR的转录,进而影响青年大鼠行为。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 引言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 GLP-1及其中枢作用的研究进展
• 1 GLP-1及其受体研究进展
• 2 GLP-1的中枢作用研究进展
• 第二章 海马GR和早期程序化研究进展
• 1 海马GR研究进展
• 2 GR早期程序化研究进展
• 第三章 DNA甲基化及其检测方法概述
• 1 DNA甲基化研究进展
• 2 DNA甲基化检测方法概述
• 第二篇 试验研究
• 第四章 新生期注射GLP-1质粒对大鼠行为和肾上腺功能的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 第五章 新生期注射GLP-1质粒对大鼠海马GR表达及GR启动子甲基化的影响
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 第六章 新生期注射GLP-1质粒对大鼠海马GLP-1R和NGFI-AmRNA表达的影响
• 1 试验方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 第七章 猪海马GR 5’UTR甲基化的品种差异研究
• 1 材料与方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 致谢
• 文章