论文摘要
目的:通过检测人类卵子周围卵丘细胞的线粒体膜电位（△ψ m）的改变,反映线粒体内膜的完整性,研究卵丘细胞线粒体内膜完整性及线粒体存活状态对卵子及胚胎体外发育的影响。方法:进行卵胞浆内单精子注射（ICSI）治疗的23位患者常规超促排卵后取得155个卵子,用透明质酸酶拆除卵子周围的卵丘细胞,并对卵子进行成熟度的评估。对成熟的MⅡ期卵子进行ICSI操作后将卵子置于5%CO2、 37℃二氧化碳培养箱中培养。同时分别收集每个卵子的卵丘细胞,用磷酸盐缓冲液离心洗涤后,应用差速离心法抽提线粒体。吸取等量抽提好的线粒体样本采用亲脂性阳离子荧光染料JC-1（Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide）染色,荧光分光光度计测定荧光强度值,并分别计算出相同细胞数下的荧光强度值。荧光强度值反映出线粒体膜电位的大小,进一步反映出线粒体内膜的完整性。ICSI后14-16小时观察记录卵子的受精情况,继续培养观察胚胎的进一步发育情况。根据卵子成熟度、受精及胚胎发育情况将卵子及胚胎分组,对比各组间卵丘细胞线粒体荧光强度值,从而反映各组间线粒体膜电位的差异,由此分析人类卵丘细胞线粒体内膜完整性对卵子及胚胎体外发育的影响。结果:（1） GV期卵子较MⅠ期、MⅡ期卵子周围卵丘细胞的荧光强度值显著降低,MⅠ期卵子较MⅡ期卵子周围卵丘细胞的荧光强度山东大学硕士学位论文值显著降低,说明GV期、Ml期卵子卵丘细胞线粒体内膜完整性较MH期卵子降低。（2）未受精MH期卵子组卵子周围卵丘细胞的荧光强度显著低于受精组,说明未受精组卵子周围卵丘细胞的线粒体内膜完整性较受精组MH期卵子组降低。（3）死亡的胚胎、含碎片较多的胚胎、发育停滞的胚胎同其他胚胎相比卵子周围卵丘细胞的荧光强度值显著性降低,说明死亡的胚胎、含碎片较多的胚胎、发育停滞的胚胎卵丘细胞线粒体内膜完整性较其他胚胎的卵子降低。 结论:卵丘细胞线粒体内膜完整性反映线粒体的存活状态,内膜完整性降低影响卵子的成熟、受精及胚胎的体外发育。关键词:卵丘细胞;线粒体内膜;线粒体膜电位;卵母细胞;受精;胚胎发育;细胞凋亡
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