论文摘要
本论文以蚕蛹（Silkworm pupae）为原料进行了三方面研究：以蚕蛹为培养基主要成分，以实验室保存的纳豆菌JN-14为出发菌株，采用纤维蛋白平板法测定纳豆激酶酶活，对纳豆菌固体、液体发酵生产纳豆激酶（nattokinase, NK）的条件进行了研究，对发酵产品进行冷冻干燥，测定发酵产品及冻干粉的成分；对蚕蛹酶解物的抗高血压活性进行了初步研究，以Alcalase碱性内切蛋白酶等六种蛋白酶酶解蚕蛹，以体外ACE抑制活性为指标，对酶解条件进行优化，筛选出体外体外ACE抑制活性最高的蛋白酶。研究复合酶解物体外体外ACE抑制活性。通过动物实验，研究酶解物体内降血压活性。研究结果表明：固体发酵最佳培养条件为：蚕蛹在121℃高压蒸煮20min，培养基含水量20%，物料厚度1cm，葡萄糖0.6%，明胶1%，接菌量3%，37℃恒温发酵24h。纳豆菌在此条件下培养，产纳豆激酶活力为2147.08IU/g。发酵产品主要成分含量：粗蛋白质65.28%，可溶性蛋白质16.85%，总糖9.03%，多糖4.02%。固体发酵冻干粉活力为26563.80IU/g，主要成分含量：粗蛋白85.96%，可溶性蛋白27.12%，总糖16.38%，多糖7.14%。纳豆菌液体最佳培养条件为：蚕蛹0.9%，葡萄糖1%，明胶0.5%，NaCl0.5%，K2HPO40.3%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，初始pH7.0；最佳培养条件为：装液量20mL，接菌量2%，摇床转速150r/min，培养温度37℃，培养时间48h。纳豆菌在此条件下培养，产纳豆激酶活力相当于尿激酶1559.08IU/mL。发酵液主要成分含量：粗蛋白质32.08mg/mL，可溶性蛋白质12.21mg/mL，总糖5.23%，多糖2.01%。液体发酵冻干粉活力为43270.13IU/g，主要成分含量：粗蛋白74.04%，可溶性蛋白24.26%，总糖21.71%，多糖14.43%。在所选的六种蛋白酶中，Alcalase碱性内切蛋白酶酶解物的体外ACE抑制活性最高，其最佳酶解条件为：底物浓度15%，加酶量750U/g蛋白质，温度55℃，pH7.0，酶解时间4h，该条件下获得的酶解物体外ACE抑制活性为89.50%。单酶酶解产物的体外ACE抑制活性强于复合酶解物的体外ACE抑制活性。动物实验结果表明：蚕蛹的Alcalase碱性内切蛋白酶酶解物体内降血压活性最强。