重组人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）新检验方法的建立和验证

论文摘要

目的和意义2010版中国药典三部已收载重组人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）,其中对原液、半成品、制剂的质量标准和检验方法均有较为系统的要求,但与国外先进药典比较还是有所差距。本课题参考美国药典和欧洲药典的具体要求,进行了新检验方法的建立和验证,为以后在国内提高质量标准提供依据。研究方法主要通过SDS-PAGE电泳、等电聚焦、反相高效液相色谱（RP-HPLC）、尺寸排阻色谱（SEC）、体外细胞活性（NFS-60,MTS）、动态浊度内毒素检测法等研究手段和研究方法建立重组人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）的新检验方法。研究成果基本建立了重组人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）的纯度、体外活性、内毒素的新检验方法,并完成了初步的验证。结论及意义使用新建立的方法对杭州九源基因工程有限公司生产的重组人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）按照欧美的质量标准进行检验,结果符合规定。这为重组人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）在国内提高质量标准提供了重要的依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 符号缩写说明
• 第一章 前言
• 1.1 重组人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）简介
• 1.2 重组人粒细胞刺激因子（rhG-CSF）质量研究状况
• 1.3 各国药典质量标准差异及本文重点
• 第二章 SDS-PAGE电泳纯度检测方法的建立和验证
• 2.1 方法的建立
• 2.1.1 方法原理
• 2.1.2 仪器设备
• 2.1.3 试剂
• 2.1.4 检验操作
• 2.2 方法的验证
• 2.2.1 染色法的确定
• 2.2.2 重复性
• 2.2.3 检测限和耐用性
• 2.3 小结
• 第三章 等电聚焦纯度检测方法的建立和验证
• 3.1 方法的建立
• 3.1.1 方法原理
• 3.1.2 仪器设备
• 3.1.3 试剂
• 3.1.4 检验操作
• 3.2 方法的验证
• 3.2.1 重复性和检测限
• 3.2.2 耐用性
• 3.3 小结
• 第四章 反相高效液相色谱（RP-HPLC）纯度检测方法的建立和验证
• 4.1 方法的建立
• 4.1.1 方法原理
• 4.1.2 仪器设备
• 4.1.3 色谱条件
• 4.1.4 系统适用性
• 4.2 方法的验证
• 4.2.1 精密度
• 4.2.2 检测限
• 4.2.3 三批样品检验
• 4.3 小结
• 第五章 尺寸排阻色谱（SEC）纯度检测方法的建立和验证
• 5.1 方法的建立
• 5.1.1 方法原理
• 5.1.2 仪器设备
• 5.1.3 色谱条件
• 5.1.4 系统适应性
• 5.2 方法的验证
• 5.2.1 柱状态试验
• 5.2.2 进样重复性
• 5.2.3 精密度
• 5.2.4 检测限
• 5.2.5 三批样品检验
• 5.2.6 新老方法的对比
• 5.3 小结
• 第六章 体外细胞活性（NFS-60,MTS）检测方法的建立和验证
• 6.1 方法的建立
• 6.1.1 方法原理
• 6.1.2 仪器设备
• 6.1.3 培养基、试剂、细胞株
• 6.1.4 检验操作
• 6.1.5 结果处理
• 6.2 方法的验证
• 6.2.1 有效范围
• 6.2.2 精密度
• 6.3 小结
• 第七章 动态浊度内毒素检测方法的建立和验证
• 7.1 方法的建立
• 7.1.1 方法原理
• 7.1.2 仪器、器材
• 7.1.3 试剂
• 7.1.4 检验操作
• 7.1.5 结果判定
• 7.2 方法的验证
• 7.2.1 供试品稀释倍数的确定
• 7.2.2 重复性
• 7.2.3 三批样品内毒素测定
• 7.3 小结
• 第八章、总结
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的学术论文目录