米曲霉发酵蝇蛆蛋白产生活性肽及其抗氧化活性研究

论文摘要

以新鲜工程蝇蛆为实验材料,以0.2 mol/L、pH 8.0的磷酸盐缓冲液对蝇蛆浸提。测定提取液蛋白质、总糖、脂肪、总氮以及氨基氮含量,SDS-PAGE鉴定蝇蛆蛋白分子量分布。蝇蛆提取液蛋白质浓度为9.88 mg/mL,脂肪含量为0.24 mg/mL,总糖含量为0.25 mg/mL,总氮含量为0.5 mg/mL,氨基氮含量为1.23 mg/mL。SDS-PAGE电泳图谱检测蝇蛆提取液含9条蛋白条带,其分子量分别为:91.8 kD,58.9 kD,42.9 kD,41.9 kD,33.0 kD,23.9 kD,18.2 kD,16.9 kD,16.4 kD。经凝胶成像软件分析得出9条带中分子量为91.8 kD的条带含量最多。以米曲霉（Aspergillus oryzae）沪酿3.042转化蝇蛆蛋白,72 h发酵液蛋白酶活最高,发酵后的蝇蛆蛋白中91.8 kD组分被消耗,转化形成了8条新的蛋白条带,其分子量分别为:65.9 kD,49.8 kD,49.2 kD,44.7 kD,29.8 kD,25.8 kD,25.6 kD,22.4 kD。Tricine-SDS-PAGE电泳图谱检测转化后有小分子肽产生,其分子量分别为:5.9 kD,5.0 kD,4.3 kD。双缩脲法测定96 h发酵液肽含量为7.89 mg/mL。体外抗氧化活性研究结果表明,蝇蛆提取液转化前后对羟基自由基和超氧阴离子均有一定的清除作用,其中96 h发酵液在25 mg/mL时清除羟基自由基和超氧阴离子的能力达到最大,分别为88.79 %、95.45 %。与蝇蛆浸提液原液相比较,其清除羟基自由基和超氧阴离子的能力分别提高了28.04 %、22.72 %。以果蝇（Drosophila melanogaster,Oregon K）为实验动物,比较96 h发酵液和蝇蛆浸提液原液的体内抗衰老能力。结果表明96 h发酵液在25 mg/mL时对雌雄果蝇寿命的延寿率分别为:29.15 %、35.82 %,蝇蛆浸提液原液在25 mg/mL时对雌雄果蝇寿命的延寿率分别为:26.66 %、31.73 %。二者相比较,96 h发酵液对果蝇寿命的延长较蝇蛆浸提液原液有所提高。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 文献综述
• 1.1 工程蝇蛆概述
• 1.1.1 蝇蛆简介
• 1.1.2 工程蝇蛆的基本概念与养殖
• 1.2 工程蝇蛆的营养价值及应用
• 1.3 蝇蛆常规开发产品
• 1.4 生物活性肽的生理功能及其制备方法
• 1.4.1 生物活性肽的生理功能
• 1.4.2 生物活性肽的制备方法
• 1.5 蝇蛆肽国内外研究现状
• 1.6 蝇蛆肽的制备
• 1.7 本研究的目的和意义
• 第2章 蝇蛆提取液的制备和性质
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 试剂
• 2.1.3 仪器
• 2.1.4 方法
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 蝇蛆浸提液蛋白质含量
• 2.2.2 蝇蛆浸提液脂肪含量
• 2.2.3 蝇蛆浸提液总糖含量
• 2.2.4 蝇蛆浸提液总氮含量
• 2.2.5 蝇蛆浸提液氨基氮含量
• 2.2.6 SDS-PAGE 电泳图谱
• 2.3 小结
• 第3章 蝇蛆蛋白的米曲霉生物转化
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 试剂
• 3.1.3 仪器
• 3.1.4 方法
• 3.2 结果与讨论
• 3.2.1 米曲霉生长曲线
• 3.2.2 不同发酵时间蛋白质含量变化曲线
• 3.2.3 不同发酵时间氨基氮含量变化曲线
• 3.2.4 不同发酵时间蛋白酶活曲线
• 3.2.5 不同发酵时间 SDS-PAGE 电泳图谱
• 3.2.6 72 h 蛋白酶活性电泳图谱
• 3.2.7 不同发酵时间 Tricine-SDS-PAGE 电泳图谱
• 3.2.8 转化后生物活性肽的分析
• 3.2.9 脱色处理对转化前后样品的影响
• 3.3 小结
• 第4章 蝇蛆蛋白米曲霉发酵液的抗氧化活性分析
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 试剂
• 4.1.3 仪器
• 4.1.4 方法
• 4.2 结果与讨论
• 4.2.1 对羟基自由基的清除能力
• 4.2.2 对超氧阴离子的清除能力
• 4.2.3 对果蝇寿命的影响
• 4.3 小结
• 第5章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间取得的科研成果