骨髓间充质干细胞构建小口径组织工程化血管的实验研究

论文摘要

第一部分 成人骨髓间充质干细胞的分离和鉴定 目的 本实验拟通过体外细胞培养的方法，将间充质干细胞自骨髓血中分离出来，并加以纯化、鉴定，进一步在体外的培养条件下研究其增殖及生长的特性，从而探讨为组织工程化血管研究提供种子细胞的可能性。 方法 收集成人骨髓血，采用密度梯度离心和贴壁生长的方式，提取单个核细胞进行体外培养；收集第2～3代（P2～P3）细胞行流式细胞仪检测细胞抗原表达（CD34、CD45、CD11a，CD14、KDR、CD105、HLADR）；采用细胞计数的方法，绘制原代培养和传代培养细胞的生长曲线。 结果 通过密度梯度离心和贴壁生长的方法，可以获取具有一定形态特点、贴壁生长、增殖活跃的骨髓间充质干细胞；该细胞表达KDR、CD105，但不表达CD34、CD45、CD11a，CD14、HLADR等；原代培养曲线显示，第2～6d为生长潜伏期，第7～8d开始，贴壁细胞已形成大小不一的多个细胞克隆，第8～10d进入对数增长期；第12～14d进入个平台期；传代培养的细胞多于P10后开始出现衰老的现象，传代培养的潜伏期为24～48h，传代培养的对数增长期为4～6d，接种后8～9d，细胞的增殖、生长逐渐缓慢，进入平台期。 结论 1．利用密度梯度离心和贴壁的方法可以获取较高纯度的BMMSCs；2．该BMMSCs具有大量增殖的功能，可满足组织工程种子细胞的需要；3．BMMSCs表达CD105、KDR，不表达HLA-DR、CD34、CD45、CD11a、CD14。 第二部 分骨髓间充质干细胞定向诱导为血管平滑肌样细胞、内皮样 细胞的实验研究 目的 本实验通过诱导动物骨髓间充质干细胞向血管平滑肌样细胞和血管内皮样细胞分化，通过形态学和相关抗原的鉴定，探讨其作为血管壁种子细胞的可行性。

论文目录

• 英文缩略词对照表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：骨髓间充质干细胞构建小口径组织工程化血管的实验研究
• 序言
• 第一部分 成人骨髓间充质干细胞的分离和鉴定
• 一、材料和方法
• 1.材料
• 2.检测方法
• 3.实验步骤
• 二、实验结果
• 1.BMMSCs的提取和培养细胞的光镜观察
• 2.人骨髓MSCs的原代培养曲线分析
• 3.人骨髓MSCs的传代培养曲线分析
• 4.BMMSCs的的表面抗原鉴定
• 三、讨论
• 四、结论
• 第二部分 骨髓间充质干细胞定向诱导为血管平滑肌样细胞、内皮样细胞的实验研究
• 一、材料和方法
• 1.材料
• 2.检测方法
• 3.实验步骤
• 二、实验结果
• 1.犬BMMSCs的提取和培养细胞的光镜观察
• 2.BMMSCs向血管平滑肌样细胞定向诱导分化
• 3.BMMSCs向血管内皮样细胞诱导分化
• 三、讨论
• 1.BMMSCs向VSMLCs的诱导分化
• 2.BMMSCs向VELCs的诱导和分化
• 四、结论
• 第三部分 平滑肌样细胞和胶原包埋PGA支架组织相容性的实验研究
• 一、材料和方法
• 1.材料
• 2.方法
• 二、结果
• 1.胶原包埋PGA支架的大体和直接镜下结构
• 2.组织学观察
• 3.甲苯胺蓝染色
• 4.扫描电镜观察
• 5.细胞生长曲线
• 三、讨论
• 四、结论
• 第四部分 体外构建初级组织工程小口径血管、体内植入血管壁强化
• 一、材料和方法
• 1.材料
• 2.方法
• 二、结果
• 1.Brdu标记平滑肌细胞和内皮细胞的免疫荧光观察
• 2.DAPI标记内皮样细胞
• 3.支架表面种植内皮细胞后的免疫荧光观察
• 4.皮下培养4w的病理所见
• 5.皮下培养6w的病理所见
• 6.皮下培养8w病理所见
• 7.压力实验
• 8.实验组皮下培养8w Brdu标记细胞的免疫荧光观察
• 三、讨论
• 四、结论
• 第五部分 组织工程化血管在活体移植的动物实验
• 一、材料和方法
• 1.材料
• 2.方法
• 二、结果
• 1.移植后即刻
• 2.移植后1w大体病理所见
• 3.移植后2w大体病理所见
• 4.组织工程化血管移植后2w血管壁HE染色
• 5.组织工程化血管移植后2w血管壁细胞vWF和β肌动蛋白的免疫荧光检查
• 6.组织工程化血管移植后2周血管壁细胞Brdu标记细胞的免疫荧光观察
• 三、讨论
• 四、结论
• 结束语
• 参考文献
• 文献综述（一）
• 骨髓间充质干细胞的研究进展
• 参考文献
• 文献综述（二）
• 组织工程化血管的研究进展
• 参考文献
• 个人简历
• 学习及工作经历
• 博士研究生期间发表论文
• 学习、工作留影
• 致谢