不同羟基磷灰石纳米颗粒基因载体性能的比较研究

论文摘要

目的:为寻找更为安全、高效的非病毒型基因载体,对10种新改良的羟基磷灰石（Hydroxyapatite,HAT）纳米颗粒的体外基因载体性能进行评估。方法:用透射电镜观察了纳米颗粒的形态,并在室温下观察其悬浮稳定性;测定了经过改良的10种HAT纳米颗粒在不同pH值和不同的HAT纳米颗粒浓度环境下的DNA结合和保护能力、体外细胞转染能力和对Hela细胞的生物相容性;并探讨了用于HAT纳米载体灭菌的方法。结果:10种纳米载体经制备工艺改良后在广泛的pH值范围内与DNA具有良好的结合能力;经过非病毒型基因载体聚乙烯亚胺（Polyethylenimine,PEI）等表面活性剂处理的HAT纳米载体与DNA具有更好的结合能力;而未经PEI等表面活性剂处理的HAT颗粒的悬浮稳定性较差,导致其在低浓度时与DNA的结合能力较弱。细胞克隆集落实验证实10种改良的HAT纳米颗粒在转染浓度范围内未见明显的毒性改变;而经过PEI表面修饰及分散剂处理的HAT颗粒在浓度高于1500μg/ml时表现出明显的细胞毒性。第8种HAT纳米载体转染效率最高,在人宫颈癌上皮细胞（简称Hela细胞）中的转染效率约为20%,在人鼻咽癌上皮细胞（简称CNE-1细胞）中的转染效率约为35%。对照组脂质体在Hela细胞中转染效率约70%,在CNE-1细胞中转染效率约为85%。透射电镜观察发现,高温灭菌法对HAT纳米颗粒无粒径膨胀影响。结论:10种改良的HAT纳米载体在广泛pH范围内与DNA的结合能力强,在转染浓度范围内与Hela细胞具有良好的生物相容性。虽然第8种HAT颗粒在Hela细胞中的转染效率稍高于我们前期研究使用的HAT纳米载体,但与脂质体比较仍有待于进一步提高。灭菌试验提示,高温灭菌法是一种可靠、简便、可行的HAT纳米载体灭菌方法。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 正文
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 第三章 实验结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢