猴头菌属不同菌种发酵产物的比较研究

论文摘要

猴头菌是一种珍贵的药食兼用菌,其有效成分多糖类物质被广泛应用于消化道溃疡、抗肿瘤等药物的研发,并取得了很好的临床效果。但是,对猴头菌液体发酵培养时菌体代谢规律的研究还有待进一步深入。目前,国内外有关猴头菌属不同菌种间差异的研究尚未见报道,且真菌中同属不同种间代谢产物的区别也鲜见报道。所以,本研究从实验室的液体摇瓶培养和工厂化的液体深层发酵两方面,比较猴头菌属两不同菌种在相同培养条件下胞外代谢产物的差异,为保护吉林省菌物药物原料提供理论依据。本研究分为三个部分:第一部分,采用生物学和分子生物学方法对小刺猴头菌与猴头菌的菌丝体进行了比较研究。经拮抗实验、发酵菌丝形态观察、子实体复原形态及RAMP分子标记的研究,结果证明两菌种为猴头菌属不同菌种。第二部分,在相同液体摇瓶培养条件下,将两菌种在玉米浆培养基和红糖培养基中分别培养一个月。培养期间,每两天对发酵液进行取样。采用苯酚-硫酸法、3,5—二硝基水杨酸比色法测定不同样品中总糖、还原糖的含量;采用考马斯亮蓝法测定发酵液中蛋白质含量的变化;并采用紫外光谱扫描和荧光光谱扫描全面检测胞外代谢产物的动态变化。结果表明:两菌种在相同培养基培养和相同菌种在不同培养基中培养,糖和蛋白质等代谢产物的变化趋势有一定差异。红糖液体培养基有利于多糖的产生,玉米浆液体培养基有利于小分子类物质的生成。第三部分,在相同的条件下对小刺猴头菌和猴头菌进行工厂化液体深层发酵。然后对胞外药效活性成分—多糖采用相同的分离、纯化方法,即用80℃水提、三倍95%乙醇沉淀多糖,用Sevag法除去游离蛋白质,用透析的方法除去小分子杂质,用乙醇分级沉淀,DEAE-32纤维素柱层析分级,除去部分色素、蛋白质等杂质,用Sepharose CL-6B凝胶柱层析分别分离出胞外均一组分的多糖。经醋酸纤维素薄膜电泳、Sepharose CL-6B凝胶柱层析等检测,证明了小刺猴头菌种多糖（HCP）与猴头菌种多糖（HEP）都为均一组分多糖,其分子量分别为:HCP 46386,HEP 26671。再对两菌种的均一组分多糖分别进行气相色谱分析,结果表明:小刺猴头菌多糖的单糖组成主要是葡萄糖。猴头菌多糖的单糖组成是葡萄糖和阿拉伯糖,其摩尔比为2.54:0.84。本研究经过对两菌种胞外代谢产物的动态监测和胞外活性成分多糖的组分分析发现,两菌种间存在明显差异。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 引言
• 1.1 猴头菌属概述
• 1.2 猴头菌属真菌液体发酵研究概述
• 1.3 真菌多糖的提取、分离及纯化方法概述
• 1.4 猴头菌属代谢产物-多糖组分的比较研究
• 1.5 研究的目的和意义
• 第二章 猴头菌属不同菌种菌丝体的比较研究
• 2.1 实验材料、仪器与药品
• 2.2 研究方法
• 2.3 结果与分析
• 2.4 讨论
• 第三章 猴头菌属不同菌种胞外代谢产物的比较研究
• 3.1 实验材料、仪器与药品
• 3.2 研究方法
• 3.3 结果与分析
• 3.4 讨论
• 第四章 猴头属不同菌种胞外主要药效成分的比较研究
• 4.1 实验材料、仪器与药品
• 4.2 研究方法
• 4.3 结果与分析
• 4.4 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介