微乳毛细管电动色谱在中药指纹图谱中的应用

论文摘要

微乳电动毛细管色谱（MEEKC）是近年来在胶束电动毛细管色谱（MEKC）基础上发展起来的一种电泳新技术,可以同时分离水溶性的、脂溶性的、带电的或不带电的物质,所分离物质的极性范围比MEKC更宽,分析窗口更宽,分离效率也更高。本实验将MEEKC技术应用于中药指纹图谱的分析,建立了中药大黄的MEEKC指纹图谱,并与其HPLC指纹图谱分析结果进行比较,聚类结果基本一致,表明MEEKC在中药指纹图谱的研究上是又一有利的手段。首先,本实验研究了微乳毛细管电动色谱体系中,表面活性剂、助表面活性剂、微乳液的内相、有机改性剂等微乳组成对分离窗口的影响。以甲醇为电渗流标记物测定电渗流时间,以强疏水性化合物菲为标记物测定微乳液滴（假固定相）的迁移时间,分析MEEKC分离窗口的变化。研究表明,微乳组成中阴离子表面活性剂SDS与有机添加剂甲醇、乙腈使分离窗口明显增大,助表面活性剂正丁醇使分离窗口变小,油的影响不大。在后面指纹图谱的建立工作中可以根据需要调节分离窗口,以达到良好的分离效果。其次,采用MEEKC方法建立了不同来源大黄样品的指纹图谱,为其质量控制提供依据。使用未涂层石英毛细管柱（75μm×65cm,有效长度55cm）,采用的缓冲液为SDS-正丁醇-正辛烷-10mmol/L硼砂溶液（w/w为3.3%∶6.6%∶0.8%∶89.3%）并通过添加10%的乙腈组成的O/W型微乳体系,分离电压18 kV,检测波长280 nm。结果通过聚类分析和相似度分析处理,14个大黄样品被初步聚为三类:唐古特大黄样品,掌叶大黄一般品和掌叶大黄次品。本方法简便、可靠,可用于大黄质量评价的有效手段,使MEEKC在中药指纹图谱研究中开辟了新的应用途径。最后,采用HPLC方法建立了上述大黄样品的指纹图谱。方法采用Nucleodur C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相以甲醇∶0 .5%磷酸水溶液（1∶9,V/V）作为A相,乙腈作为B相进行梯度洗脱,流速0.8 mL/min,检测波长280 nm。通过聚类分析和相似度分析处理,14个不同来源的大黄样品也被初步聚为三大类:唐古特大黄样品,掌叶大黄一般品和掌叶大黄次品,与MEEKC方法下的大黄样品分类结果基本一致,从而进一步验证了MEEKC应用在中药指纹图谱研究上的可行性。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 前言
• 1.2 中药指纹图谱的概念、起源、发展
• 1.2.1 中药指纹图谱的概念
• 1.2.2 中药指纹图谱的起源
• 1.2.3 国内、外中药指纹图谱的发展概况
• 1.3 中药指纹图谱建立的意义和原则
• 1.3.1 中药指纹图谱建立的意义
• 1.3.2 中药指纹图谱建立的原则
• 1.4 中药指纹图谱的分类
• 1.4.1 按应用对象分类
• 1.4.2 按测定手段分类
• 1.5 中药指纹图谱的构建技术要求
• 1.5.1 实验要求
• 1.5.2 药材的来源
• 1.5.3 实验样品的制备
• 1.6 色谱指纹图谱的建立
• 1.6.1 色谱指纹图谱的指标和参数
• 1.6.2 指纹图谱的建立步骤
• 1.6.3 指纹图谱数字化
• 1.7 中药指纹图谱的研究重点及关键问题
• 1.7.1 中药指纹图谱的研究重点
• 1.7.2 中药指纹图谱研究的关键问题
• 1.8 微乳毛细管电动色谱的概况和发展
• 1.8.1 微乳液的性质
• 1.8.2 MEEKC 的分离机理
• 1.8.3 MEEKC 国内外的研究现状
• 1.9 小结
• 第二章 微乳毛细管电动色谱分离窗口的研究
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 材料与试剂
• 2.2.2 实验仪器及设备
• 2.2.3 溶液的制备
• 2.2.4 电泳条件
• 2.3 结果与讨论
• 2.4 结论
• 第三章 大黄药材MEEKC 指纹图谱研究
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 样品来源
• 3.2.2 实验试剂与仪器设备
• 3.2.3 微乳缓冲液制备
• 3.2.4 供试品溶液的制备
• 3.2.5 对照品溶液的制备
• 3.2.6 参照物的确定
• 3.2.7 电泳条件
• 3.2.8 系统适应性
• 3.2.9 仪器精密度的考察
• 3.2.10 方法重现性的考查
• 3.2.11 样品稳定性的考察
• 3.2.12 指纹图谱的建立
• 3.3 结论
• 第四章 大黄药材HPLC 指纹图谱研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 仪器与试剂与药品
• 4.2.2 供试品溶液的制备
• 4.2.3 对照品溶液配制
• 4.2.4 色谱条件
• 4.2.5 检测波长的选择
• 4.2.6 系统适应性
• 4.2.7 仪器精密度的考察
• 4.2.8 方法重现性的考查
• 4.2.9 样品稳定性的考察
• 4.2.10 大黄HPLC 指纹图谱的建立与评价
• 4.3 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文