中华锯齿米虾卵黄蛋白的纯化及基因克隆

论文摘要

中华锯齿米虾（Neocaridina denticulata sinensis）具有生长迅速、生命力顽强、生长周期短、容易饲养等特点,是一种良好的实验材料。目前对中华锯齿米虾卵黄蛋白（vitellin, Vn）的研究比较少,本文对中华锯齿米虾的卵黄蛋白进行了分离纯化,同时采用基因工程方法研究其卵黄蛋白的编码基因,获得其编码框内部分序列,为最终揭示卵黄蛋白的合成机理奠定基础。卵黄蛋白的分离纯化及部分生化性质：利用聚丙烯酰胺凝胶电泳,采用不同的染色方法,从成熟中华锯齿米虾卵巢中鉴定出卵黄蛋白,用电泳洗脱的方法对其纯化,并对其部分生化性质进行分析。研究发现,中华锯齿米虾卵黄蛋白总分子量为438 kDa, SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析它由两个亚基组成。同时发现,两个亚基的糖染色反应均成阳性,说明两个亚基上均有糖辅蛋白的结合。样品缓冲液中β-巯基乙醇的有无并不影响亚基分离,推测亚基之间不存在二硫键。卵黄蛋白的基因工程方法研究：在解剖中华锯齿米虾卵巢及肝胰腺的基础上,使用TRNzol试剂提取中华锯齿米虾卵黄蛋白总RNA, RT-PCR扩增编码卵黄蛋白基因片段,将所得PCR产物测序,所测得462 bp序列与三种已知甲壳动物卵黄蛋白序列相似性较高,且相似区域都在三种卵黄蛋白的编码框架之内,推测所得序列为中华锯齿米虾卵黄蛋白基因片段。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 绪论
• 1.1 研究现状
• 1.1.1 雌性特异蛋白生化性质的研究现状
• 1.1.2 卵黄蛋白的发生
• 1.1.3 卵黄蛋白原的基因表达的研究进展
• 1.2 研究目的和意义
• 第2章 中华锯齿米虾卵黄蛋白的纯化与部分生化性质分析
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 实验仪器
• 2.1.3 实验试剂
• 2.1.4 实验方法
• 2.2 实验结果与讨论
• 2.2.1 卵黄蛋白的鉴定与纯化
• 2.2.2 卵黄蛋白的分子量和亚基组成分析
• 2.2.3 亚基的性质研究
• 第3章 卵黄蛋白的基因克隆
• 3.1 实验材料、试剂与仪器
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 主要试剂
• 3.1.3 常用试剂和培养基配方
• 3.1.4 主要实验仪器
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 卵黄蛋白基因cDNA片段的制备
• 3.2.2 序列分析
• 3.3 实验结果与讨论
• 3.3.1 中华锯齿米虾卵黄蛋白总RNA的提取结果
• 3.3.3 RT-PCR扩增中华锯齿米虾卵黄蛋白基因片段
• 3.3.4 PCR产物扩增产物测序结果及分析
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录:个人简历