栉孔扇贝大规模死亡病原学研究

栉孔扇贝大规模死亡病原学研究

论文摘要

用平板画线法从患病栉孔扇贝(Chlamys farreri)体内分离到了一种原核生物(简称QDP)。QDP可以在改进的液体培养基MEM(含2.2%NaCl,5%小牛血清)和脑心浸液(含2.2% NaCl)中生长;菌落在显微镜下(150×)为无色、透明的小点状;革兰氏染色阴性;菌体为圆形或近似圆形。QDP在发育过程中有两种状态,一种为未成熟阶段,直径小于100nm;另一种为成熟阶段,直径变化很大,最小约60nm,最大可达4μm以上。较小的个体有拟核、核糖体和新月状的空泡,未见细胞壁;较大的个体有细胞壁,胞内大部分被空泡充满,未见拟核和核糖体。栉孔扇贝组织超簿切片电镜观查证实QDP的存在。QDP的密度随着生长发育时间的不同而有所变化,繁殖高峰期密度较大。建立了密度梯度离心结合滤膜过滤分离技术,优化人工培养条件。最适生长温度为23℃,最适生长pH值为7.4,最适生长盐度相当于细胞培养液所需的盐浓度(0.85%NaCl)。提取的QDP核酸能被RNase A降解,且没有检测到DNA。以PCR、RT-PCR扩增其16SrRNA基因序列片段,PCR反应没有扩增出扩增子,而RT-PCR则扩增出了16S rRNA基因序列片段,经测定其序列全长度为1430bp,经与GENEBANK中的16S rRNA片段比较分析,与6种不同科的微生物的同源率最高的为95%-95.47%。采用温度梯度和病原浓度梯度回归感染实验方法,较为系统地研究了QDP的致病性。研究结果表明:QDP对栉孔扇贝有强烈的致病作用,高温(23℃以上)是其致病的必要条件,证实DQP是栉孔扇贝大规模死亡的病原体之一。

论文目录

  • 前言
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 第一章 贝类病原学及免疫机制的研究进展
  • 第一节 贝类病原学
  • 第二节 贝类免疫机制
  • 第三节 栉孔扇贝病及病原体研究的展望
  • 第二章 一株特殊微生物 QDP 的发现
  • 1 引言
  • 2 材料、方法与结果
  • 2.1 实验材料
  • 2.2 革兰氏染色
  • 2.3 病料的处理
  • 2.4 接种与分离过程
  • 2.5 光学显微镜下QDP 的形态特性
  • 2.6 电子显微镜下QDP 的形态特征
  • 3 讨论
  • 4 小结
  • 第三章 特殊原核核生物的分离方法
  • 1 引言
  • 2 材料与方法
  • 3 结果
  • 3.1 微生物形态特征比较
  • 3.2 分离方法的比较
  • 3.3 计数法
  • 4 讨论
  • 第四章 特殊微生物 QDP 的生物学特性
  • 1 引言
  • 2 材料与方法
  • 3 结果
  • 3.1 形态特征及理化特性
  • 3.2 最佳浓缩离心力
  • 3.3 最适培养条件
  • 4 讨论
  • 5 小结
  • 第五章 特殊微生物 QDP 的超显微结构
  • 1 引言
  • 2 材料与方法
  • 3 结果
  • 3.1 QDP 形态特征
  • 3.2 QDP 的内部结构
  • 4 讨论
  • 5 小结
  • 第六章 特殊原核生物 QDP 对栉孔扇贝致病性
  • 1 引言
  • 2 材料与方法
  • 3 结果
  • 3.1 症状及组织病理变化
  • 3.2 温度与发病的关系
  • 3.3 浓度与发病的关系
  • 4 讨论
  • 5 小结
  • 第七章 特殊微生物 QDP 核酸类型及16S rRNA 基因的分析
  • 1 前言
  • 2 材料与方法
  • 3 结果
  • 3.1 核酸、PCR 和RT-PCR 产物
  • 3.2 核酸序列分析
  • 3.3 同源性及系统发育分析
  • 3.4 遗传物质的分子探针直接标记
  • 4 讨论
  • 5 小结
  • 第八章 总结
  • 参考文献
  • 在读期间发表论文
  • 致谢
  • 相关论文文献

    标签:;  ;  ;  ;  

    栉孔扇贝大规模死亡病原学研究
    下载Doc文档

    猜你喜欢