谢筱莉林群英(江西省南昌县人民医院检验科330200)
【摘要】目的:调查临床分离的葡萄球菌对克林霉素诱导耐药状况。方法:收集本院2012-2013年分离到的47株红霉素耐药、克林霉素敏感临床分离株，按美国国家临床实验室标准化研究所（CLSI/NCCLS)2004年推荐的双纸片法做克林霉素诱导耐药（D-试验）。结果:47株葡萄球菌中克林霉素诱导耐药株16（34%）。结论:我院葡萄球菌克林霉素诱导耐药率较高，应提高对诱导耐药葡萄球菌的监测和控制。
【关键词】克林霉素红霉素葡萄球菌D试验
【中图分类号】R969【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）16-0150-01
随着抗生素的不断发展和大量使用，葡萄球菌对克林霉素在体外敏感，但临床无效的病例不断上升。多数葡萄球菌属对大环内酯类耐药的机制是靶位的改变和外排泵机制。msrA基因编码对大环内酯类耐药是产生一种外排泵；erm基因编码使细菌核糖体23sRNA大亚基2058位的腺苷酸甲酰化引起的，造成细菌核糖体对大环内酯类—林可霉素—链阳菌素B（MLSB）类药物的亲和力降低，对克林霉素产生诱导耐药，同时也对链阳菌素B耐药，因此也称为大环内酯类—林可霉素—链阳菌素B（MLSB）耐药；少数是产生大环内酯类抗生素磷酸转移酶，使抗生素失活。检测葡萄球菌的克林霉素诱导耐药率可以指导临床合理的经验用药和了解流行情况。
1材料与方法
1.1材料
1.1.1菌株收集江西省南昌县人民医院2012年1月-2013年12月红霉素耐药、克林霉素敏感临床分离株47株，其中金葡菌11株，凝固酶阴性葡萄球菌36株。标本种类包括痰液、咽拭子、脓液。
1.1.2试剂葡萄球菌的细菌鉴定为杭州天和微生物试剂有限分司;药敏试验培养基为MH培养基（江门凯林贸易公司）；克林霉素、红霉素纸片（英国BBL公司产品）。
1.1.3方法：双纸片法检测出克林霉素诱导耐药（D试验）：根据2004年NCCLS[推荐在MH琼脂培养基上贴克林霉素（2μg/片）纸片和红霉素（15μg/片）纸片，纸片边缘距离为16～26mm，孵育16～18h。D试验阳性结果是克林霉素抑菌圈在靠近红霉素的一边出现钝化，抑菌圈呈现“D型”，显示为诱导耐药。
2结果
2.1双纸片法检测出克林霉素诱导耐药结果
从2012.1-2013.12期间分离到的红霉素耐药、克林霉素敏感47株临床分离株中12株为金黄色葡萄球菌、35株为凝固酶阴性葡萄球菌（见下表）。D试验阳性的分别为5株和11株，用x2修正检验得出在P=0.05的水平上，两者有统计学差异。诱导耐药在金黄色葡萄球菌和凝固酶阴性葡萄球菌中的分布具有差异性。
2.2葡萄球菌克林霉素诱导耐药的检测结果如下表：
TestresultStaphylococcusCoagulase-negtive
aureus（12）staphylococus（35）
Dtest（+）511
Dtest（-）724
x2=4.164P=0.037
3讨论
克林霉素具有口服吸收好，对胃肠道刺激小，对肾脏没有不良作用，适用于治疗葡萄球菌感染，特别用于治疗皮肤和软组织感染以及青霉素类过敏的社区感染病人。由于耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）具有的多重耐药基因，克林霉素诱导耐药多发生在甲氧西林敏感的葡萄球菌（MSS）中。因此在MSS的药敏结果中，对红霉素耐药而克林霉素中敏或敏感的菌株，不能直接报告“克林霉素敏感”，必须进行D-试验，以排除诱导型耐药引起的临床治疗失败；在MRS中，由于不能完全排除克林霉素诱导耐药的存在，对红霉素耐药而克林霉素中敏或敏感的菌株，可以根据临床的需要，做克林霉素的D-试验。诱导耐药的漏检会造成临床治疗的失败，目前微量稀释法和自动化药敏仪尚不能检出此种诱导耐药机制，D试验做为一种表型初筛方法，虽然灵敏度低和有假阴性的存在，尚不能与基因检测结果完全符合，但其做为一种检测克林霉素诱导耐药的方法对于常规实验室非常重要，2004年NCCLS，建议对红霉素耐药、克林霉素中敏或敏感的葡萄球菌必须做D试验。纸片边缘距离对结果的影响非常明显，纸片距离在16～20mm之间的D圈明显比20～26mm组产生的D圈更为清晰，在26-28mm组之间会造成漏检。
参考文献
[1]NCCLS．Performancestandardsforantimicrobialsusceptibilitytesting[S].14thinformationalsupplementM100-S14，2004，24；40-47．
[2]薛作英，陆惠香，范伟伟．克林霉素的临床运用[J]．中医药临床杂志，2004，3：291-291．