HBV对肝癌细胞中AKR1C1基因表达的影响

论文摘要

乙型肝炎病毒（HBV）感染在各种传染病中发病率居第2位,死亡率居第3位,目前全球约有3.5亿HBV携带者。HBV感染可引起各种急、慢性病毒性肝炎及肝硬化等疾病,并与肝癌的发生有密切的关系。但是,HBV感染的具体机制仍无定论,细胞致变机理尚不完全清楚。HBV病毒基因编码的产物在其生命周期以及致病过程中发挥重要作用,其中X蛋白被认为是具有多种功能的调节蛋白,在基因转录,蛋白降解以及凋亡等过程中发挥作用。AKR1C1基因编码醛酮还原酶家族1中的一个成员C1,AKR1C1过度表达于许多肿瘤当中,并且其过度表达与抗肿瘤药的药物抵抗有关。有研究者通过基因芯片检测到AKR1C1在稳定表达HBx的肝癌细胞中表达高于未转染HBx的肝癌细胞,这一结果提示HBV基因产物可能对肝癌细胞中AKR1C1的表达具有调节作用。本课题研究了HBV对肝癌细胞中AKR1C1基因表达的影响,并对其作用机制进行了初步探讨。通过RT-PCR和real-time PCR的方法,我们首先检测了HepG2.2.15和HepG2细胞中AKR1C1 mRNA的表达情况,结果显示,AKR1C1基因在HepG2.2.15细胞中的表达高于HepG2细胞约1.5倍;在此基础上,我们成功构建了AKR1C1基因启动子虫荧光素酶报告质粒,并分别与HBV表达质粒以及HBV所编码的四种蛋白HBx、HBs、HBp、HBc的表达质粒共同转染HepG2细胞,通过双荧光素酶检测系统检测虫荧光素酶活性,结果发现,在HBV表达质粒与AKR1C1基因启动子虫荧光素酶报告质粒共转染的HepG2细胞中,虫荧光素酶的活性明显增强,为对照组3.37倍,相对HBs、HBp、HBc,HBx升高虫荧光素酶活性的作用最强。本课题研究结果表明HBV能够上调AKR1C1在肝癌细胞中的表达,其作用机制可能是通过作用于AKR1C1基因启动子来实现的,并且HBx在这一转录激活过程中发挥重要作用。这为我们探索HBV引发肝癌的致病机理提供了新的思路。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 比较HepG2.2.15 和HepG2 细胞中AKR1C1 mRNA 的表达差异
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二部分 HBV 对 AKR1C1 基因启动子活性的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第三部分 HBV 基因产物对AKR1C1 基因启动子活性的影响
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 攻读学位期间撰写和发表论文