论文题目: 鼠源性抗人心肌肌钙蛋白I单克隆抗体人源化改造的初步研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 内科学
作者: 李妍妍
导师: 张寄南,杨笛
关键词: 段基因,嵌合抗体,真核,蛋白表达,表达载体,聚合酶链反应
文献来源: 南京医科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 背景:心肌肌钙蛋白Ⅰ(cardiac troponin I,cTnI)是诊断心肌损伤的特异性标识物,检测cTnI已广泛用于临床诊断急性冠脉综合症,判断预后,指导治疗。外周血cTnI升高时判断急性心肌梗死和损伤的金指标。本研究所已建立分泌cTnI单克隆抗体的杂交瘤细胞株,研制出了检测cTnI的试剂盒,用于临床诊断急性心肌梗死和心肌损伤性疾病,已获得国家Ⅱ类新药证书(体外诊断,国药证字S20040009)。由于抗人cTnI单抗具有高特异高敏感专一识别cTnI,已作为体内心肌损伤诊断试剂和治疗新药的载体,是应用的潜在领域之一。但鼠源性单克隆抗体的人抗鼠抗体反应,半衰期短等缺陷,使之不能用于体内诊断及作为治疗心肌损伤的药物载体,必须对其进行人源化修饰。嵌合抗体是人源化抗体的第一代抗体,这种抗体技术路线较简单,易于操作;抗体完整性好,在体内潴留时间长;鼠源性抗体的亲和力和特异性都得到了保留,在临床上具有潜在的应用前景。目前尚未见有关抗人cTnI单抗人源化改造的文献报道。 目的:克隆人cTnI抗体的Fab段基因,划出可变区基因,构建抗人cTnI嵌合抗体的真核表达载体,转染真核细胞SP2/0,分泌性表达嵌合抗体蛋白,为将来连接某些药物治疗心肌损伤打下基础。 方法:提取分泌cTnI抗体的杂交瘤细胞总RNA,RT-PCR扩增Fab段的重链、轻链基因,将PCR产物连接到pMD-18T载体,转化大肠杆菌,测序证实。划出上述基因序列的可变区部分,重新设计含有
论文目录:
中英文缩略语
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 鼠源性抗人cTnI抗体Fab段基因克隆和序列分析
材料和方法
结果
讨论
第二部分 抗人cTnI嵌合抗体的真核表达载体的构建
第一节 抗人cTnI单克隆抗体可变区基因的克隆
材料和方法
结果
讨论
第二节 抗人cTnI嵌合抗体的真核表达载体的构建
材料和方法
结果
讨论
第三部分 抗人cTnI嵌合抗体在SP2／0细胞中的表达
材料和方法
结果
讨论
研究创新之处
参考文献
致谢
综述
知识产权声明
发布时间: 2005-07-22
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