论文摘要
正常的精子发生依赖于生精细胞的分裂分化和生精细胞凋亡之间的平衡，其背后是错综复杂的基因-蛋白调控网络。寻找并掌握这些基因／蛋白的功能，将能更深入地阐明精子发生的分子调控机理。 NYD-SP6是本实验室克隆出的一条编码PHD蛋白的新基因，前期在mRNA水平对其进行的一些初步研究已经高度提示它是一条新的人精子发生相关基因。本研究中，我们对NYD-SP6基因在精子发生过程中的明确作用及其机制进行了探讨。 首先我们在蛋白水平检测了NYD-SP6在人睾丸组织中的细胞定位。构建了pET-22b-NYD-SP6（全长ORF）原核表达质粒，经IPTG诱导得到49KD原核表达蛋白。用纯化的蛋白免疫BalB／C小鼠后获得NYD-SP6多克隆抗体。进一步进行人睾丸组织免疫组化分析，显示NYD-SP6蛋白在包括精原细胞、精母细胞和精子细胞的各级生精细胞核中表达，提示NYD-SP6可能直接调控生精细胞的某种（些）生物学过程，影响精子发生。 进一步我们以生精细胞为研究平台，检测NYD-SP6在精子发生过程中的作用。由于NYD-SP6在小鼠中有高度同源的基因，因此我们在小鼠精原细胞系中超表达NYD-SP6，进行了以下功能研究： ① 应用流式细胞术检测了超表达组细胞与对照组细胞的细胞周期，结果显示两组在G0／G1期、S期及G2／M期的细胞比例均无显著差异。提示NYD-SP6对生精细胞的分裂增殖无影响。 ② 应用流式细胞术、DNA ladder电泳、彗星实验三种方法检测了超表达组细胞与对照组细胞分别在自发情况和化学药物Taxol诱导