论文摘要
珠蚌多糖是从贝类动物三角帆蚌[Hyriopsis cumingii（Lea）]软体部分提取分离得到的。经本课题前期研究发现其在免疫调节、抗癌,和对动物整体化学性肝损伤的保护方面表现出明显的作用。本课题致力于珠蚌多糖对体外培养肝细胞损伤的保护作用研究,探索其保肝作用机制。并用不同工艺技术对珠蚌多糖进行降解以及对降解后的珠蚌低聚糖的保肝活性进行了初步研究。主要内容包括以下几个部分:1.文献研究查阅有关珠蚌的研究文献,了解珠蚌的历史沿革和现代研究进展。以及查阅国内外有关动物多糖的文献,了解动物多糖的特性和其药理作用。同时查阅有关多糖降解的研究进展。为实验工作奠定文献资料基础。2.珠蚌多糖对体外培养肝细胞损伤的保护作用研究研究珠蚌多糖（ZBP）对肝细胞损伤的保护作用及其机制。培养L-02型人肝细胞,以四氯化碳（CCl4）以及过氧化氢（H2O2）体外诱导肝细胞损伤,检测培养上清液中天门冬氨酸转换酶（AST）和丙氨酸氨基转换酶（ALT）水平,测定肝细胞中丙二醛（MDA）和过氧化物岐化酶（SOD）含量,MTT法检测细胞存活率和增殖活性。结果表明,ZBP可明显降低由CCl4以及H2O2诱导损伤导致肝细胞培养上清液中AST和ALT水平升高及肝细胞MDA水平升高,并可提高由CCl4以及H2O2诱导损伤导致肝细胞存活率降低和SOD的活性降低。说明ZBP对肝细胞有直接保护作用,可对抗由CCl4及H2O2诱导的肝细胞损伤,该作用可能与其抗氧化作用有关。3.珠蚌多糖降解及其活性的筛选用粘度法测定珠蚌多糖的粘度,其特性粘度（粘均分子量）为4.64dL·g-1。分别用α-淀粉酶、超声波和过氧化氢对珠蚌多糖进行降解。研究发现过氧化氢氧化降解法能有效的降解珠蚌多糖。经过正交设计考察工艺,以细胞增值活率和低聚糖粘度为评价指标,获得最佳降解工艺为H2O2浓度6%,反应温度50℃,反应时间2h,乙酸浓度3.5%。珠蚌低聚糖的得率均在60%左右,得到的珠蚌低聚糖的特性粘度（粘均分子量）为1.74dL·g-1。降解工艺简便可行。培养L-02型肝细胞,用过氧化氢体外诱导肝细胞损伤,MTT法检测珠蚌低聚糖对肝细胞损伤的保护作用。并分别采用四氯化碳和D-氨基半乳糖盐酸盐诱导小鼠急性化学性肝损伤,采用灌胃和腹腔注射两种给药途径,以血清中ALT、AST、SOD、MDA为指标,比较降解前后两种多糖的保肝活性。结果表明,通过过氧化氢降解法得到珠蚌低聚糖,保肝活性较未降解珠蚌多糖有所增强。4.珠蚌多糖的中试研究根据前期实验室研究的珠蚌粗多糖提取工艺路线,在江苏省康缘药业股份有限公司进行了珠蚌多糖提取工艺中试放大试验研究,以进一步对生产工艺的合理性、可行性进行验证和完善。研究表明,珠蚌多糖生产的工艺路线为:新鲜珠蚌软体→洗净加工→提取（2次）→过滤→浓缩→离心→上清液→醇沉→静置→沉淀→干燥→浅黄色粉末→沉淀所得珠蚌粗多糖中糖含量>70%。共进行了三批中试放大实验,工艺稳定。根据相关规定,制定了中试产品企业生产标准。