论文摘要
研究目的：通过差异蛋白质组学技术比较获得初诊急性淋巴细胞白血病（ALL）患儿白血病细胞与健康儿童白细胞表达蛋白质谱之间的差异蛋白,为深入研究儿童ALL发生发展机制、探索新的诊疗途径提供依据。研究对象与方法：1.分别留取15例初诊ALL患儿的骨髓细胞（原始+幼稚淋巴细胞比率>90%）为实验组与15例正常健康体检儿童外周血细胞为正常对照组,ALL患儿均经骨髓细胞学检查与免疫学分型检查确诊,且无多系增生现象。2.用淋巴细胞分离液获取两组单个核细胞标本并裂解获得其内表达的蛋白质,进行双向凝胶电泳（2-DE）,保证每例样本有3次独立重复试验。3.扫描获得凝胶图像,应用ImageMaster 2D Platinum 7.0 Training软件,根据体积差异倍数≥2及Anova P<0.05设置软件检测标准,分析获得两组差异蛋白点。4.手工切点进行胶内酶切获取蛋白肽段,进行MALDI-TOF-MS质谱分析,连接IPI human humanv3.07数据库鉴定蛋白质。结果：1.实验组与正常对照组分别检测到（889±52）、（834±41）个蛋白点。比较获得实验组较正常对照组有4个高表达蛋白点和11个低表达蛋白点,等电点多在pH4.5-7之间,分子质量集中在18.4-45KD范围内。2.质谱分析、数据库鉴定获得2个高表达蛋白Glutathione S-transferase P（谷胱甘肽S转移酶P）、Prohibitin(抑制素1及6个低表达蛋白60S acidic ribosomal protein PO （60S酸性核糖体蛋白PO）、Pyridoxine-5’-phosphate oxidase（磷酸吡哆醇氧化酶）、Triosephosphate isomerase 1 variant（磷酸甘油醛异构酶-1）、Peroxiredoxin 4（过氧化还原酶4）、Actin, cytoplasmic（细胞质肌动蛋白）、Hypothetical protein FLJ26567（假设蛋白FLJ26567）。结论：1.ALL患儿与健康儿童细胞内蛋白表达存在明显差异,并鉴定获得8种差异蛋白,与儿童ALL的发生发展有关。其中谷胱甘肽转移酶P、细胞质肌动蛋白与儿童ALL的关系与既往非蛋白质组学研究其与白血病的关系结果相似,抑制素、60s酸性核糖体蛋白PO、磷酸毗哆醇氧化酶、磷酸甘油醛异构酶-1、过氧化还原酶4与假设蛋白FLJ26567与儿童ALL的关系是国内外首次发现,既往未见研究。2.该8种蛋白均有可能成为儿童ALL新的诊断标志物与药物靶点,当儿童出现细胞内谷胱甘肽转移酶P及抑制素水平显著增高及60s酸性核糖体蛋白PO、磷酸吡哆醇氧化酶、磷酸甘油醛异构酶-1、过氧化还原酶4、细胞质肌动蛋白水平明显减低时需警惕急性白血病的的可能。
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