青霉素结合蛋白克隆表达及在牛乳青霉素残留检测中的应用

青霉素结合蛋白克隆表达及在牛乳青霉素残留检测中的应用

论文摘要

利用源于肺炎链球菌的青霉素结合蛋白PBP 2x对于β-内酰胺类抗生素具有高度亲和力的性质,本文致力于提出基于受体(PBP 2x)分析快速检测牛乳中β-内酰胺类抗生素残留的新方法。本文利用生物工程的方法,构建了青霉素结合蛋白PBP 2x的表达载体,并实现了其在大肠杆菌中的表达。其后,利用GST亲和层析方法成功的制备了纯化的青霉素结合蛋白PBP 2x。利用计算机模拟了PBP 2x与兽医临床常用的四种β-内酰胺类抗生素分子对接;建立了PBP 2x与β-内酰胺类抗生素反应的动力学模型,并以氨苄青霉素为例,通过试验测定了二者反应的基本动力学参数。最后,本文提出了应用青霉素结合蛋白检测牛乳β-内酰胺类抗生素残留的新方法。

论文目录

  • 提要
  • 第一章 绪论
  • 1.1 选题的目的和意义
  • 1.2 问题的提出
  • 1.3 抗生素残留检测方法研究现状
  • 1.4 本文研究的主要内容
  • 第二章 青霉素结合蛋白PBP 2X 的克隆
  • 2.1 目的基因的选择
  • 2.2 试验材料
  • 2.3 表达载体构建方法
  • 2.4 辅助试验方法
  • 2.5 结果与分析
  • 2.6 讨论
  • 本章小结
  • 第三章 PBP 2X 在大肠杆菌中的优化表达
  • 3.1 菌株与质粒
  • 3.2 试剂
  • 3.3 培养基
  • 3.4 仪器设备
  • 3.5 试验方法
  • 3.6 试验结果
  • 本章小结
  • 第四章 PBP 2X 蛋白的亲和层析纯化
  • 4.1 GST 亲和层析纯化
  • 4.2 PBP 2X 蛋白等电点
  • 本章小结
  • 第五章 计算机模拟分子对接
  • 5.1 PBP 2X 与Β-内酰胺类抗生素分子对接的理论基础
  • 5.2 PBP 2X 与Β-内酰胺类抗生素分子动力学模拟算法
  • 5.3 PBP 2X 与Β-内酰胺类抗生素分子对接理论方法
  • 5.4 PBP 2X 与四种Β-内酰胺类抗生素分子对接结果
  • 本章小结
  • 第六章 PBP 2X 与配体反应的动力学模型及参数
  • 6.1 PBP 2X 与Β-内酰胺类抗生素反应动力学模型的建立
  • 6.2 PBP 2X 与AMPI 反应速率常数的计算方法
  • 6.3 PBP 2X 与氨苄青霉素反应速率常数的试验方法
  • 6.4 试验结果
  • 本章小结
  • 第七章 间接竞争受体分析检测牛乳青霉素G 残留
  • 7.1 试验材料与方法
  • 7.2 试验结果
  • 7.3 讨论
  • 本章小结
  • 第八章 受体分析结合酶联免疫检测牛乳头孢噻呋残留
  • 8.1 试验材料与方法
  • 8.2 试验结果
  • 8.3 讨论
  • 本章小结
  • 第九章 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻博期间发表的学术论文及其它成果
  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 相关论文文献

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