CNTF非经典信号转导途径的神经保护功能

论文摘要

本实验应用了大鼠海马神经元原代培养、活细胞连续照像、活细胞计数、活细胞内游离[Ca2+]测定、免疫组化等方法,以Glu离子型受体激动剂L-NMDA诱发海马神经元损伤为细胞损伤模型,用JAK/STATs阻断剂PTP i-2阻断CNTF已知的经典信号转导途径,观察CNTF非经典信号转导途径的神经保护功能,并探讨其可能机制。主要实验结果如下: 1.L-NMDA（100μ mol/L,200μ mol/L,400μ mol/L,500μ mol/L）可引起海马神经元损伤反应;这一损伤反应在作用时间处于1～2hr之间时呈时间依赖性,在L-NMDA作用浓度介于0～500μ mol/L之间时呈剂量依赖性。 2.CNTF可有效抑制L-NMDA对海马神经元的损伤作用。 2.1 活细胞连续照相结果:加入CNTF（1μg/μl）5min后,再给予L-NMDA（200μmol/L）,2hr后观察到海马神经元的胞体和突起的形态无显著性变化。 2.2 活细胞计数结果:选择10个视野,将胎盘蓝染色计数结果经统计学处理,L-NMDA（200μ mol/L）组与对照组之间活细胞数有显著差异（P<0.01）;而CNTF（1μg/μl）组,CNTF（1μg/μl）+L-NMDA（200μ mol/L）组与对照组之间,活细胞数的差异无显著性意义（P>0.05）。提示CNTF可以降低L-NMDA损伤海马神经元的作用,提高海马神经元的存活率。 3.PTP i-2阻断已知的CNTF经典信号转导途径中JAK/STATs后,观察到CNTF保护海马神经元抵抗L-NMDA的损伤作用仍然存在。这一结果强烈支持在CNTF已知信号转导通路中的JAK/STATs上游,存在其它未知的作用途径,发挥神经保护作用。 3.1 活细胞连续照相结果:以PTPi-2（100μg/L）孵育海马神经元30min,再加CNTF（1μg/μl）孵育5min,然后给予200μmol/L L-NMDA,观察2hr,发现海马神经元形态无显著性变化。 3.2 活细胞计数结果:选10个视野,胎盘蓝染色计数结果经统计学处理,

论文目录

• 英文缩写
• 中英文摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 应激与神经营养因子
• 1.2 NMDA及NMDA受体
• 1.2.1 NMDA受体的结构和分布
• 1.2.2 NMDA受体活性的胞内调控
• 1.3 CNTF经典信号转导途径
• 1.3.1 已知的CNTF信号转导途径
• 1.3.2 JAK/STATs途径
• 1.3.2.1 JAK/STATs
• 1.3.2.2 JAK/STATs途径的调控机制
• 1.3.2.3 JAK/STATs途径中尚待研究的问题
• 1.4 CNTF经典信号转导途径难于解释的现象
• 1.5 本研究的内容和目的
• 1.5.1 内容
• 1.5.2 目的
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 主要试剂
• 2.1.2 主要仪器
• 2.1.3 主要试剂配置
• 2.1.4 动物
• 2.2 方法
• 2.2.1 神经细胞原代培养
• 2.2.2 活细胞连续照像
• 2+]测定'>2.2.3 活细胞内游离[Ca²⁺]测定
• 2.2.4 海马神经元CNTF受体亚基gp130组织化学染色法
• 2.2.5 活细胞计数
• 2.4.6 实验分组
• 2.2.7 统计学处理
• 3 实验结果
• 3.1 不同浓度L-NMDA对原代培养海马神经元形态的影响及CNTF的作用
• 3.1.1 原代海马神经元的生长情况
• 3.1.2 不同浓度L-NMDA对海马神经元的影响
• 3.1.2.1 活细胞连续照相结果
• 3.1.2.2 活细胞计数结果
• 3.2 CNTF对L-NMDA损伤海马神经元的保护作用
• 3.2.1 活细胞连续照相结果
• 3.2.2 活细胞计数结果
• 3.3 阻断CNTF经典信号转导途径上游的JAK/STATs后CNTF的保护作用
• 3.3.1 活细胞连续照相结果
• 3.3.2 活细胞计数结果
• 2+]结果'>3.4 活细胞内游离[Ca²⁺]结果
• 3.5 免疫组化结果
• 4 讨论
• 4.1 实验标本选取依据
• 4.2 CNTF对L-NMDA损伤海马神经元的作用
• 4.2.1 L-NMDA对海马神经元的作用
• 4.2.2 CNTF对L-NMDA损伤海马神经元的保护作用
• 4.3 CNTF经典途径被阻断后的神经保护功能
• 2+在CNTF非经典途径保护功能中的意义'>4.4 Ca²⁺在CNTF非经典途径保护功能中的意义
• 5 结论
• 6 参考文献
• 致谢
• 综述
• 学习期间发表的文章