122株猪2型链球菌耐药性检测及耐药基因的鉴定

论文摘要

随着养猪业的迅猛发展,猪链球菌病也在世界范围内广泛传播。猪链球菌病是由猪链球菌引起的一种重要人畜共患病,尤其是血清2型猪链球菌,不仅对猪的致病性最强,而且可感染特定人群并致死,给人类公共卫生和养猪业带来巨大影响。猪链球菌病可导致猪的脑膜炎、关节炎、心内膜炎以及败血症等症状。另外,健康猪只在鼻腔、扁桃体、上呼吸道和支气管也可携带猪链球菌,加速了这种疾病的扩散和传播。为研究来自全国各个地区的猪2型链球菌耐药性及耐药基因的流行情况,本研究针对实验室分离的122株2型链球菌开展了以下工作。1.采用K-B（Kir bv Bauer）纸片法检测2004～2006年从湖南、湖北、河南、浙江、广西、河北、北京、广东、江西、安徽等十三省分离的122株2型链球菌对14种抗生素的耐药性。结果显示,所选菌株除对青霉素G、阿莫西林、先锋霉素V和万古霉素敏感,对其他9种抗生素药物存在不同程度耐药。其中磺胺类、红霉素、四环素、链霉素的耐药情况尤为严重。2.按地区统计分析多重耐药的情况,发现多重耐药普遍存在于来自全国各地的菌株,以5耐6耐为主,并且同时对磺胺、红霉素、四环素和链霉素四种药物耐药的菌株在4耐以上的菌株中占主体地位。3.选取大环内酯类（ermA、ermB、mefA）、四环素（tetM、tetC、tetO）和氨基糖苷类抗生素（Aph-3’）的耐药基因扩增引物对122株猪2型链球菌进行检测,发现在对大环内酯类耐药的菌株中抗性基因符合率最高,为78.8%,其他两种药的符合率分别为24.6%和31.1%。4.将检出频率较高的ermB、tetM与Aph-3’基因测序并用软件进行分析。以ermB基因为例,与GenBank中金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌和其他猪链球菌的ermB基因序列进行比对,分析其亲缘关系,探讨其可能的耐药传播机制。综上所述,本研究分析了2004～2006年全国13个省122株猪2型链球菌对常用的13种抗生素的耐药情况,反映了我国猪链球菌2型耐药的普遍性和严重性,对猪2型链球菌的治疗与预防用药具有一定的参考价值。对部分耐药基因检测分析,探讨SS2可能的耐药基因分子流行病学规律,为猪2型链球菌病的预防和治疗提供一些理论依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略词表（abbreviation）
• 1 文献综述
• 1.1 猪2型链球菌研究进展
• 1.1.1 猪2型链球菌的血清型
• 1.1.2 猪2型链球菌的毒力因子
• 1.1.3 猪2型链球菌流行病学特征
• 1.2 猪2型链球菌耐药性的研究进展
• 1.2.1 猪链球菌用药特点
• 1.2.2 猪链球菌的耐药性
• 1.3 细菌耐药机理的研究进展
• 1.3.1 耐药基因
• 1.3.2 整合子的研究进展
• 2 研究的目的和意义
• 3 材料和方法
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 实验用培养基
• 3.1.2 常用试剂
• 3.1.3 实验菌株
• 3.1.4 耐药基因扩增引物
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 药敏试验
• 3.2.2 菌株PCR模板的制备
• 3.2.3 耐药基因的检测
• 3.2.4 PCR产物的回收与连接
• 3.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备
• 3.2.6 连接产物的转化及鉴定
• 3.2.7 菌株耐药基因的测序
• 4 结果与分析
• 4.1 猪2型链球菌耐药率检测结果
• 4.2 多重耐药性检测结果
• 4.3 耐药基因检测结果
• 4.4 耐药基因检测统计
• 4.5 符合率
• 4.6 耐药基因序列比对与同源性分析
• 4.6.1 大环内酯类耐药基因ermB序列同源性分析
• 4.6.2 四环素耐药基因tetM序列同源性分析
• 4.6.3 氨基糖苷类耐药基因aph3'序列同源性分析
• 5 讨论
• 5.1 猪2型链球菌耐药性流行特点
• 5.1.1 耐药率分析
• 5.1.2 多重耐药与地域分布
• 5.2 检测药物与耐药基因的选择
• 5.3 耐药性与耐药基因相关性
• 5.4 关于耐药基因同源性的讨论
• 参考文献
• 致谢