论文摘要
目的:研究MG132对HepG2细胞UPP和MDR基因表达的影响,探讨MG132诱导肝癌细胞HepG2凋亡的机制。 方法:采用流式细胞术、Hoechst33258染色、吖啶橙（AO）染色检测HepG2细胞凋亡;采用RT-PCR方法检测UPP相关基因E1、E2、E3、26S proteasome、p53、Caspase3及MDR mRNA的表达;采用免疫细胞化学方法观察p53、Caspase3及P-gp蛋白表达的变化;采用Western-Blot检测P-gp蛋白的表达;采用高效液相色谱分析法检测细胞内表阿霉素（EPI）的浓度。 结果:经流式细胞术检测,蛋白酶体抑制剂MG132（2μmol/L,5μmol/L）处理24h后HepG2细胞凋亡率增加。细胞荧光染色出现核浓缩、碎裂等凋亡特征。MG132处理后HepG2细胞UPP的相关基因E1、E2、E3、26S proteasome mRNA表达下降,p53、Caspase3 mRNA水平和蛋白水平增高。1μmol/L MG132与1μg/ml表阿霉素联合应用可增强对HepG2细胞的杀伤作用,二者合用可达到单用2μg/ml表阿霉素的致凋亡效应;MG132能够下调表阿霉素处理后HepG2细胞MDRmRNA转录水平及P-gp蛋白的表达。与单用表阿霉素组相比,联合应用小剂量的表阿霉素和MG132处理组细胞内表阿霉素含量增高。
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