蚂蟥抗凝血的活性成分研究

论文题目: 蚂蟥抗凝血的活性成分研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 生药学

作者: 刘君

导师: 杨松松

关键词: 水蛭,蚂蟥,抗凝血,活性成分

文献来源: 辽宁中医学院

发表年度: 2005

论文摘要: 蚂蟥为水蛭科动物蚂蟥(Whitmania pigra Whitman)的干燥全体,俗称宽体金钱蛭,是传统的活血化瘀药,具有破血通经,逐瘀消症之效,为中国药典(2000版)收载的水蛭的三个品种之一。现代诸多的药理实验表明,蚂蟥具有抗凝血、抗血栓、抗血小板聚集等药理活性。为了进一步的探讨其药理作用的物质基础,本实验对蚂蟥抗凝血的活性成分进行了较为深入的研究。为了避免炮制品对蚂蟥化学成分产生的影响,本实验的化学成分研究采用蚂蟥的鲜品,即秋季捕捉、采集后,置-20℃保存后备用。首先,以凝血时间为指标,优选了蚂蟥的提取溶媒,即分别考察了用蒸馏水提取、生理盐水提取、不同浓度乙醇提取(30%,50%,75%,95%)、正丁醇提取、正己烷提取、磷酸盐缓冲液提取的提取液对家兔全血凝固时间的影响,而最终选择了用生理盐水提取。以蛋白质的含量和抗凝效价为指标,通过正交设计优选了总蛋白的最佳提取工艺,即采用生理盐水提取二次,第一次5倍量,第二次3倍量,每次冷浸2小时的工艺方法。采用盐析法进行初步的纯化,并分别采用CM-Sepharose、DEAE-Sephadex A-50、Sephacryl S-200HR、Sepharose F.F等凝胶层析方法和制备电泳等手段分离纯化了蚂蟥抗凝血的活性成分,共得到了10个组分,经检测有9个是蛋白质,其中有三个(MH-3、MH-6、MH-7)能延长家兔全血的凝血时间及其血浆复钙时间,而MH-3和MH-6的作用较显著。药理实验表明,MH-3和MH-6均能明显的延长小鼠断尾出血时间及以毛细玻管法测定的小鼠凝血时间,表明具有较强的抗凝血作用。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)测定了其中MH-3、MH-4、MH-5、MH-6、MH-7、MH-8、MH-9、MH-10的分子量,分别为15580Da、16960Da、20230Da、22020Da、24420Da、31880Da、33770Da、46440Da;并尝试用质谱法(Mass-spectrometry)测定了MH-2的分子量约为12042Da:用氨基酸自动分析仪分析了MH-3、MH-6、MH-7的氨基酸组成。对比了蚂蟥(Whitmania pigra Whitman)和水蛭(Hirude nipponica Whitman)的干品药材的抗凝血活性、氨基酸组成和二者蛋白质的电泳指纹图谱。对蚂蟥的干品药材进行了指纹图谱的质量标准研究和脂肪酸的组成分析。对蚂蟥鲜品的提取物进行了质量标准研究。

论文目录:

ABSTRACT

摘要

前言

第一章水蛭的文献研究

第一节水蛭的本草学研究

第二节水蛭的现代研究

一水蛭的品种考证

二水蛭的化学成分研究

三水蛭的药理作用研究

第二章蚂蟥抗凝血的活性成分研究

第一节蚂蟥抗凝血活性部位的提取、分离和纯化

一活性部位的筛选

二提取工艺考察

三蚂蟥抗凝血活性蛋白的初步纯化

四脱盐

五提取工艺

六蚂蟥抗凝血活性蛋白的分离与纯化

第二节理化测试

第三节单体蛋白的纯度检查

一高效液相色谱法

二 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法

第四节单体蛋白的活性检测

一对家兔全血凝固时间的影响

二对家兔血浆复钙时间的影响

第五节氨基酸组成分析

第六节分子量测定

一 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳法

二质谱法

第三章蚂蟥提取物的质量标准研究

第一节蚂蟥提取物中蛋白质的含量测定

第二节蚂蟥提取物的效价测定

第三节蚂蟥提取物的电泳指纹图谱研究

第四章蚂蟥药材的脂肪酸组成分析

第五章蚂蟥药材的指纹图谱研究

第六章药效学研究

第一节蚂蟥提取物的药效学研究

第二节单体蛋白MH-3的药效学研究

第三节单体蛋白MH-6的药效学研究

第七章蚂蟥与水蛭药材的对比研究

第一节电泳图谱的对比研究

第二节氨基酸组成的对比研究

第三节抗凝活性的对比研究

第八章蚂蟥药材头部与尾部的抗凝活性的比较研究

创新点

参考文献

附图

致谢

综述

个人简历

发布时间: 2005-07-27

参考文献

[1].新型抗凝、防栓剂[D]. 莫炜.复旦大学2005

蚂蟥抗凝血的活性成分研究

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