放射性肺损伤早期的肺组织重建机制研究

论文摘要

目的：用分子生物学和细胞生物学方法，从细胞水平和分子水平深入研究肺纤维化的发生机制，研究肺泡巨噬细胞、成纤维细胞、Ⅳ型胶原和明胶酶B在放射性肺损伤中的关系，进而阐明肺组织重建的机理及其与肺纤维化发生之间的联系。 方法：用一定剂量的60Coγ射线照射C57小鼠和Wistar大鼠。将C57小鼠分为2组：照射组（n=9）和对照组（n=9）。分别于照后1、2、4w活杀取其肺组织提取总RNA。将Wistar大鼠分为对照组和照射后7d组，用0.9％的生理盐水灌洗肺脏，用差速贴壁法分离肺泡巨噬细胞，并用台盼蓝排斥试验鉴定其存活率＞95％，然后用分离好的巨噬细胞制备肺泡巨噬细胞条件培养液（Condition Medium of Alveolar Macrophage，CMAM），用于下一步试验。MTT法检测CMAM对人肺成纤维细胞（Human Lung Fibroblast，HLF）的促增殖作用，于不同的条件培养液培养HLF 6h、12h、24h、48h、72h后检测HLF的增殖情况。用CMAM大量培养HLF，于培养后的不同时间点提取总蛋白，分别用Western Blot和酶谱分析（Zymography）的方法检测Ⅳ型胶原和活性明胶酶B的含量，并进行图像分析。于C57小鼠提取的总RNA经检测其完整性和定量后，用RT-PCR检测Ⅳ型胶原、明胶酶B和TIMP-1mRNA的照射后不同时间的表达情况变化。 结果：CMAM能够促进HLF增殖，并且随时间的延长呈递增的趋势。Western

论文目录

• Sheet for Abbreviation
• Chinese Abstract
• Abstract
• 1. Intruduction
• 2. Material and Methods
• 2.1 Animals
• 2.2 Isolation and Culture of Rat Alveolar Macrophages （AM）
• 2.3 Preparation of Conditional Medium of Alveolar Macrophage
• 2.4 Human Lung Fibroblasts （HLF） Culture
• 2.5 Cell Proliferation Assay
• 2.6 Western Blot Determineation
• 2.7 Analysis of MMP-9 by Zymography
• 2.8 RNA Extraction and RT-PCR
• 2.9 Statistics Analysis
• 3. Results
• 3.1 Effect of CMAM on HLF Proliferation
• 3.2 Effect of CMAM on Synthesis of Collagen Ⅳ in HLF
• 3.3 Effect of CMAM on Collagen Ⅵ Excreting and MMP-9 Synthesis by HLF
• 60Co-γ Ray'>3.4 Expression of Collagen Ⅳ MMP-9 and TIMP-1 Genes in Mice after Irradiation by ⁶⁰Co-γ Ray
• 4. Discussion
• 5. Concluding Remarks
• 6. Legends for Figures
• 7. Acknowledgements
• 8. References
• 9. Reviews
• 10. References