花粉介导的双价抗虫基因对玉米遗传转化研究

论文摘要

本研究以玉米自交系478为受体,以质粒pBI101-Chi-Bmk为载体,在15%的蔗糖等渗溶液中,将花粉与质粒DNA混合,应用JY92-Ⅱ型超声波细胞粉碎仪进行超声波处理,然后辅以人工授粉的方法将外源基因导入到受体中,经PCR,Km涂抹检测初步证明,外源基因已整合到玉米基因组中。转化率为1.4%。 另外,本试验对影响玉米花粉介导转化的一些因素进行了研究,从等渗溶液浓度、超声波处理强度及花粉萌发辅助物的影响等方面进行了探索,认为适合玉米花粉介导的等渗溶液浓度为15%,超声波处理强度以100～200W。通过对超声波处理花粉及花粉萌发后花粉管的组织化学染色和细胞学观察,进一步证实了花粉介导植物转基因方法的可行性。 用花粉作为载体介导外源基因的转化,避免了传统的农杆菌介导法和基因枪法转化所要求的组织培养技术,转化方法简单、易操作,是一种经济、有效、能广泛应用的技术。

论文目录

• 摘要
• 1 前言
• 1.1 国内外研究动态和趋势
• 1.1.1 转基因作物研究进展
• 1.1.2 目前应用于玉米遗传改良的转基因方法
• 1.1.3 目前抗虫基因的主要种类
• 1.1.4 转几丁质酶基因的研究进展
• 1.1.5 蝎毒基因在基因工程中的的应用
• 1.1.6 几丁质酶与蝎毒蛋白双价抗虫基因的构建与其可能的用途
• 1.2 本研究的立题依据及意义
• 2 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 供试玉米品种
• 2.1.2 供试质粒
• 2.1.3 主要实验仪器
• 2.2 方法
• 2.2.1 花粉介导的转化介质及条件测定
• 2.2.2 用GUS初步检测超声波处理后的花粉的转化率
• 2.2.3 转化方法
• 2.2.4 PCR-电泳检测
• 2.2.5 NPTII基因在转化植株中的表达检测
• 3 结果与分析
• 3.1 花粉介导的转化介质的研究
• 3.1.1 不同浓度的介质溶液对花粉粒的影响
• 3.1.2 不同强度超声波对花粉粒的影响
• 3.1.3 辅助物对花粉粒的影响
• 3.1.4 用GUS检测超声波处理后的花粉的转化率
• 3.2 转化结果
• 3.2.1 转化植株田间生理性状的检测结果
• 3.2.2 PCR扩增结果
• 3.2.3 选择标记基因NPTII在转基因玉米中的表达检测
• 4 讨论与结论
• 4.1 讨论
• 4.1.1 关于花粉介导转基因方法
• 4.1.2 玉米花粉介导法转基因成活率、成株率、转化率提高的相应对策
• 4.1.3 导入目的基因提高和改善品种的抗虫性
• 4.1.4 关于NPTII的选择标记基因
• 4.1.5 关于外源基因在转基因玉米植株中的表达
• 4.2 结论
• 参考文献
• ABSTRACT
• 附图
• 致谢