论文摘要
瘦素（Leptin）是一种主要作用为抑制摄食、促进能量消耗的活性因子,食欲素-A（Orexin-A）是一种主要作用为促进摄食、抑制能量消耗的短肽。目前研究发现Leptin可通过腺苷酸活化蛋白激酶、过氧化物酶体增殖物激活受体-α等途径抑制糖原合成、促进脂肪酸氧化,Orexin-A在能量代谢中的作用及其在一定条件下的表达水平都与Leptin相反,而且它们与糖皮质激素、交感神经兴奋性、炎症介质都存在联系,提示它们可能参与调控创伤、炎症、感染后的内环境紊乱。由于肝脏、肠道是营养吸收、能量代谢的重要器官,我们考察了Leptin、Orexin-A的表达水平在肝、肠损伤时发生的变化,分析了这些变化与重要脏器的结构损伤、功能改变之间的联系,并探讨了创伤后营养支持、激素干预对它们的表达水平和脏器功能的影响。1.肝缺血/再灌注损伤后Leptin、Orexin-A表达水平的变化及与脏器功能的联系建立大鼠70%肝缺血/再灌注损伤模型,设立假手术、缺血60 min后不同时间的再灌注组。采用放免法检测Leptin、Orexin-A在外周血、各自的核心分泌器官（脂肪、下丘脑）的蛋白水平;采用苏木素-伊红染色考察与自由基损伤、能量代谢密切相关的外周脏器（肺、肝）的损伤情况,以试剂盒检测血清髓过氧化物酶、丙氨酸氨基转移酶作为肺、肝功能指标,以血清总抗氧化能力、葡萄糖作为抗自由基损伤、能量储备的代谢指标;采用免疫组化检测Leptin、Orexin-A在肺、肝的蛋白表达;采用逆转录-聚合酶链式反应检测Leptin、Orexin-A及其受体在下丘脑、脂肪、肺、肝的mRNA表达。从纵向时序变化的角度考察它们的表达改变与脏器功能的联系。结果显示,血清Leptin、总抗氧化能力和葡萄糖于再灌注后期显著升高,脂肪Leptin蛋白水平在再灌注早期显著升高,血浆、下丘脑Orexin-A蛋白水平无显著变化。再灌注后期肺、肝损伤情况及其功能指标显著改善。肺Leptin、Orexin-A蛋白表达显著降低,肝Leptin蛋白表达于再灌注早期、后期显著升高,而肝Orexin-A蛋白表达变化与之相反。各脏器Leptin、Orexin-A mRNA表达的变化趋势非常相似,其受体mRNA表达紧随它们而变化。2.营养支持、激素干预对脓毒症时Leptin、Orexin-A表达水平及脏器功能的影响第一部分的实验结果提示Leptin、Orexin-A的表达水平受能量代谢的调控,与下丘脑-脂肪-肺/肝这条功能主线存在显著联系。由于脂肪乳、胰岛素、雌二醇与能量代谢、创伤修复都存在联系,我们设想利用它们来干预创伤后的脂肪酸代谢、糖代谢和激素分泌,可能会对Leptin、Orexin-A的表达水平及脏器功能产生影响。建立大鼠盲肠结扎穿孔（CLP）致脓毒症模型,设立假手术、CLP模型和三个药物干预组。检测CLP后12 h时Leptin、Orexin-A在外周血、肺、肝的蛋白表达与它们在下丘脑、脂肪、肺、肝的mRNA表达,考察肺、肝的损伤情况以及脏器功能、代谢指标的变化。从横向干预差异的角度考察它们的表达改变与脏器功能的联系。结果显示,各组血清Leptin、总抗氧化能力、葡萄糖无显著变化,CLP模型、CLP+脂肪乳的血浆Orexin-A显著升高。CLP模型、CLP+胰岛素的血清髓过氧化物酶显著升高,CLP+胰岛素的血清丙氨酸氨基转移酶显著降低。CLP模型、CLP+雌二醇的肺、肝损伤较明显,CLP+脂肪乳、CLP+胰岛素显著改善。各组肺、肝Leptin、Orexin-A蛋白表达和各脏器Leptin、Orexin-AmRNA表达的变化不一。CLP+脂肪乳的下丘脑、脂肪Leptin mRNA表达显著升高,肺、肝Leptin mRNA表达与蛋白表达均显著降低。上述两部分的实验结果显示:Leptin、Orexin-A在肝、肠损伤介导的内环境紊乱中发生不同程度的变化,与重要脏器的结构损伤、功能改变联系密切。脂肪乳、胰岛素显著减轻肺、肝损伤,而雌二醇无明显的改善作用。虽然三种干预药物对Leptin、Orexin-A的表达水平具有不同的影响,但却提示了Leptin、Orexin-A参与三种干预药物的脏器效应通路,值得我们进一步研究。探索以Leptin、Orexin-A为核心的神经-内分泌调节机制有助于研发针对相关疾患的内源性干预方法。