甜瓜种质资源多样性的RAPD研究

论文摘要

甜瓜种质资源极其丰富,中国是重要起源地之一,有着丰富的薄皮和厚皮甜瓜种质资源。我国甜瓜种质资源的储备对我国的甜瓜产业以至世界甜瓜产业的可持续发展有着重要意义。对种质资源搜集和保存一方面保护了重要的有代表性的材料,减少或避免基因的流失和资源材料的重复。另一方面对资源材料进行遗传多样性分析,构建核心种质库,有利于进一步研究和利用种质资源。据不完全统计,全国各育种单位目前所保存的国内外甜瓜种质资源约3500份。新疆吐鲁番葡萄瓜类研究所是我国厚皮甜瓜种质的保存单位,中国农科院郑州果树所瓜类室是全国薄皮甜瓜种质的保存单位。笔者选取了30份有代表性的甜瓜种质资源,用RAPD技术对品种（系）亲缘关系进行分析,遗传多样性分析结果为我省的地方品种资源利用提供了可靠的理论依据,对甜瓜今后的育种工作具有指导意义。主要结果如下:1、用CTAB法对甜瓜嫩叶片提取基因组DNA,经紫外分光光度仪检测,1.8＜OD260/280＜2.0,OD260/230＞2.0,CTAB法提取的质量、产率完全满足于RAPD-PCR扩增,重复性好。用于RAPD结果分析,具有可靠性。2、用正交试验对反应体系中各组分优化,筛选出适合甜瓜RAPD-PCR反应参数为:DNA 100ng、引物0.30μmol/L、dNTPs 0.30 mmol/L、10×PCR Buffer 2.5μl、MgCl23 mmol/L、Taq酶1.0U。3、从60条随机引物中筛选出16条表现稳定的引物对甜瓜30个甜瓜品种（系）、杂种进行PCR扩增,共扩增出134条RAPD条带,114条为多态性条带,多态性条带频率为85.07%,平均每条引物扩增8.4个条带、包括1.3条单态性带和7.1条多态性带。每条引物的多态性带数4～12条,分子量大小为100～3000bp。4、甜瓜种质资源聚类分析表明,当相似性阀值为0.21时,全部生物型可分为薄皮甜瓜和厚皮甜瓜两类,其亲缘关系最远。用pogene31对群体的遗传多样性的统计结果表明,种群间的Nei指数为0.2638,shannon指数为0.4036。用MEGA3.1和SPSS10.0两个软件,采用不同距离算法的聚类结果基本相符合。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 目录
• 1 文献综述
• 1.1 遗传标记的种类
• 1.1.1 形态学标记（Morphological Markers）
• 1.1.2 细胞学标记（Cytological Markers）
• 1.1.3 生化标记（Biochemical Markers）
• 1.1.4 DNA分子标记
• 1.2 DNA分子标记技术
• 1.2.1 RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism）标记
• 1.2.2 RAPD（Random Amplified Polymorphic DNA）标记
• 1.2.3 SSR（Simple Sequence Repeats）标记
• 1.2.4 ISSR（Inter-simple Sequence Repeat）标记
• 1.2.5 AFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism）标记
• 1.3 DNA分子标记技术在甜瓜遗传多样性的应用
• 1.3.1 种质资源遗传亲缘关系鉴定
• 1.3.2 杂交种纯度与真实性检测
• 1.3.3 分子遗传图谱的构建
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 试验材料及来源
• 3.2 仪器、试剂
• 3.2.1 主要仪器
• 3.2.2 主要试剂
• 3.2.3 试剂配置
• 3.3 试验方法
• 3.3.1 适宜甜瓜基因组DNA提取方法的研究
• 3.3.2 RAPD引物的筛选
• 3.3.3 RAPD反应体系的优化
• 3.3.4 琼脂糖凝胶电泳
• 3.3.5 电泳谱带的记录
• 3.3.6 数据分析
• 4 结果与分析
• 4.1 适宜甜瓜基因组DNA提取方法的分析
• 4.2 RAPD体系的建立
• 4.2.1 扩增条件的优化结果
• 4.2.2 扩增程序的选择结果
• 4.2.3 RAPD体系稳定性的检测
• 4.3 RAPD引物筛选结果
• 4.4 RAPD谱带及多态性分析
• 4.5 遗传距离与RAPD聚类分析
• 5 讨论
• 5.1 适宜甜瓜基因组DNA提取的方法
• 5.2 RAPD反应对模板DNA要求
• 5.3 RAPD反应体系的优化
• 5.4 关于应用RAPD技术时所采用引物数量和统计方法
• 6 结论
• 6.1 基因组DNA的提取
• 6.2 RAPD反应条件的优化
• 6.3 聚类分析结果
• 参考文献
• 附录 甜瓜种质资源RAPD-PCR扩增图谱
• 致谢
• 作者简介