小鼠骨髓间充质干细胞与恶性黑色素瘤细胞体外共培养环境中相互作用及其机制的初步研究

论文摘要

目的 研究恶性黑色素瘤细胞与间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）间的相互作用及作用机制,从而进一步明确恶性黑色素瘤血管形成机制中内皮细胞来源和恶性黑色素瘤细胞多种因子表达情况及间充质干细胞对其表达的影响,丰富肿瘤局部微循环建立模式的相关理论,并为恶性黑色素瘤中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）自分泌机制和正反馈环路的研究提供一定的理论依据。 方法 通过四肢长骨分离和骨髓腔冲洗得到骨髓,应用贴壁筛选等细胞筛选方法,选取适当血清浓度、细胞接种密度等细胞培养条件进行小鼠骨髓间充质干细胞的分离和扩增培养,通过倒置相差光学显微镜观察细胞光镜下形态,并应用免疫组织化学染色方法,通过倒置荧光显微镜、倒置相差光学显微镜、图像采集系统观察并检测CD44、CD105、CD34和CD45等指标的染色结果进行细胞表型鉴定。 通过体外进行MSC细胞的单独对照培养和与恶性黑色素瘤细胞（B16细胞）的非接触式共培养,应用倒置相差光学显微镜对比观察和分析单独对照培养和非接触式共培养条件下的MSC细胞光镜下形态,通过激光扫描共聚焦显微镜、倒置荧光显微镜、倒置相差光学显微镜、图像采集系统观察和检测CD44、CD105、CD34、CD45、Ⅷ因子、VEGFR-1和VEGFR-2等7种指标免疫组织化学染色结果,并对所得结果进行统计学处理以明确两组间7种指标免疫组织化学染色结果的差异和观察透射电镜下超微结构的变化,以及通过激光扫描共聚焦显微镜、倒置荧光显微镜、倒置相差光学显微镜、图像采集系统观察和检测MSC细胞和与恶性黑色素瘤细胞（B16细胞）在非接触式共培养条件下的恶

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 小鼠骨髓间充质干细胞的分离、提取、扩增和鉴定
• 1.实验目的
• 2.实验材料
• 2.1 实验动物
• 2.2 实验试剂
• 2.3 实验器材
• 3.实验方法
• 3.1 小鼠骨髓间充质干细胞的分离和提取
• 3.2 小鼠骨髓间充质干细胞的体外培养和扩增
• 3.3 小鼠骨髓间充质干细胞的鉴定
• 4.实验结果
• 5.讨论
• 第二部分 在体外共培养环境中鼠源性恶性黑色素瘤细胞对小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化作用及作用机制研究
• 1.实验目的
• 2.实验材料
• 2.1 实验动物
• 2.2 实验试剂
• 2.3 实验器材
• 3.实验方法
• 3.1 体外环境B16细胞对MSC细胞的诱导分化作用
• 3.2 体外环境B16细胞对MSC细胞诱导分化的作用机制
• 4.实验结果
• 5.讨论
• 第三部分 在体外共培养环境中小鼠骨髓间充质干细胞对小鼠源性恶性黑色素瘤细胞分泌的细胞因子及相关受体的影响及作用途径的相关性研究
• 1.实验目的
• 2.实验材料
• 2.1 实验动物
• 2.2 实验试剂
• 2.3 实验器材
• 3.实验方法
• 3.1 体外环境MSC细胞对B16细胞分泌的细胞因子及其相关受体的影响
• 3.2 体外环境MSC对B16细胞分泌的细胞因子及其相关受体影响的作用途径
• 4.实验结果
• 5.讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述：间充质干细胞研究进展
• 致谢