人乳腺珠蛋白抗体鉴定及其临床意义的初步研究

论文摘要

人乳腺珠蛋白（hMAM）属子宫蛋白超家族，hMAM基因编码93个氨基酸，定位于染色体11q13，平均分子量为10.5KD，具有乳腺组织特异性，可应用于乳腺癌早期诊断、判断预后、微转移的检测等，具有很好的临床应用前景。目的本实验室利用基因工程的方法获得高纯度的免疫原，免疫小鼠，采用杂交瘤技术制备抗hMAM单克隆抗体，在此基础上，本研究采用Thermo公司Melon Gel Monoclonal IgG Purification Kit对两株单克隆抗体进行纯化，鉴定其相应的抗原表位。从新鲜乳腺癌、良性乳腺病变及正常乳腺组织中提取蛋白，用纯化的单克隆抗体进行Western Blot鉴定。随机选取国内乳腺癌、乳腺良性疾病、正常乳腺组织、乳腺癌转移组织、全身非乳腺肿瘤组织，以上述两株单克隆抗体为一抗进行免疫组织化学检测，与国外进口单克隆抗体和多克隆抗体进行比较，分析各自的灵敏性和特异性。方法：1、采用Thermo公司Melon Gel Monoclonal IgG Purification Kit对抗hMAM抗体进行纯化，得到两株单克隆抗体（MDA822、MEF521），并对其进行表位鉴定。2、从新鲜组织中,提取蛋白，用Western Blot方法鉴定hMAM在乳腺相关组织中有无表达。3、应用免疫组织化学技术检测上述两种单克隆抗体的敏感性和特异性,并与进口单克隆抗体及多克隆抗体进行比较。结果1、通过上述纯化方法，得到两株较高浓度的抗hMAM单克隆抗体，浓度分别为1.7mg/mL,2.7mg/mL；Western Blot结果显示MEF521、MDA822分别是识别hMAM43-70、56-82AA、 hMAM20-52AA片段的特异性单克隆抗体。2、应用免疫印迹法（Western Blot）检测新鲜组织中乳腺珠蛋白（hMAM）的表达情况,在乳腺癌、癌旁、正常组织及乳腺纤维腺瘤组织中均有表达，并且出现两条特异性条带。3、免疫组织化学染色结果显示乳腺珠蛋白仅在乳腺相关组织中呈阳性反应；用本课题制备的两株单克隆抗体进行检测，乳腺珠蛋白在30%-80%的乳腺癌转移组织中呈阳性反应，非乳腺组织中无阳性表达。四种抗体组，仅进口单抗ab81611组乳腺珠蛋白的表达与PR（孕激素受体，Progesterone Receptor）有关，未发现与其他临床特征相关。结论通过上述纯化方法，得到浓度较高的抗hMAM单克隆抗体，两种抗体识别的抗原表位不同；MDA822、MEF521灵敏性较ab81611差，但其特异性明显优于ab81611；与国外进口兔多抗92044比较，灵敏性和特异性相似。乳腺珠蛋白为乳腺组织特异性标志物，免疫组织化学及Western blotting均证实其在正常乳腺组织、乳腺良性疾病及乳腺癌中均有表达，除进口单抗ab81611组与PR（孕激素受体，Progesterone Receptor）有关外，暂未发现乳腺珠蛋白与其他临床特征有关。乳腺珠蛋白作为一种乳腺组织特异性蛋白，可用于乳腺癌早期诊断、判断预后、检测微转移等，我们制备的乳腺珠蛋白单克隆抗体能够填补国内空缺，为进一步研究乳腺珠蛋白的临床应用与意义奠定基础。

论文目录

• 中英文词汇对照表
• 中文摘要
• Abstract
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 标本来源
• 2.1.2 主要实验试剂
• 2.1.3 部分试剂配制
• 2.1.4 实验主要仪器
• 2.2 试验方法
• 2.2.1 抗 hMAM 单克隆抗体的纯化
• 2.2.2 抗 hMAM 单克隆抗体表位鉴定
• 2.2.3 乳腺癌组织中 hMAM 含量的 Western Blot 鉴定
• 2.2.3.1 新鲜组织蛋白提取
• 2.2.3.2 Western Blot
• 2.2.4 hMAM 免疫组化检测
• 3 结果
• 3.1 单克隆抗体纯化
• 3.2 抗原表位测定
• 3.3 组织中乳腺珠蛋白 Western Blot 鉴定
• 3.4 免疫组化检测
• 3.4.1 不同乳腺病变中四种抗体的表达
• 3.4.2 四种抗体在乳腺癌组织中的表达
• 3.4.2.1 ab81611 结果
• 3.4.2.2 MDA822 结果
• 3.4.2.3 MEF521 结果
• 3.4.2.4 多抗 92044 结果
• 3.4.3 四种抗体在乳腺癌转移组织中的表达情况
• 4 讨论
• 5 结论
• 6 本研究的创新点
• 7 参考文献
• 8.附录
• 9.致谢
• 综述
• 参考文献