视黄醇结合蛋白的表达及与其它蛋白质相互作用的研究

论文摘要

视黄醇结合蛋白（retinol binding protein,RBP）是体内将维生素A运载至靶组织的一种具有高度特异性的运载蛋白,属于疏水小分子蛋白,是由184个氨基酸组成、分子量为21KD的单一肽链蛋白质分子。本实验运用基因工程的方法首先在大肠杆菌中实现RBP的原核表达,但是经SDS-PAGE电泳检测发现RBP都以包涵体形式存在,而包涵体是没有生物学活性的,需要进一步对它进行处理才能获得具有生物活性的重组蛋白,而分离包涵体的步骤非常复杂,且目前仍没有适用各种表达产物的通用方法,因此在第二部分的实验中构建了RBP的真核表达载体pPIC9—RBP,将其转化受体毕赤酵母GS115,通过SDS—PAGE电泳筛选表达工程菌株,实现了RBP的真核表达。在本实验的最后一部分,通过免疫共沉淀和Western印迹的方法来研究视黄醇结合蛋白与其它蛋白质的相互作用,寻找与RBP有相互作用的蛋白质,从而为了解视黄醇转运和吸收机制以及相关疾病的发生、发展提供线索。

论文目录

• 第一章 前言
• 1 视黄醇
• 1.1 生化作用及缺乏症
• 1.1.1 构成视觉细胞内感光物质
• 1.1.2 参与糖蛋白的合成
• 1.1.3 其它作用
• 1.2 视黄醇结合蛋白
• 1.2.1 RBP的基因结构及表达
• 1.2.2 RBP的蛋白质高级结构
• 1.2.3 RBP结构与功能的关系
• 1.2.4 RBP的分子相互作用
• 1.2.5 RBP的临床意义
• 1.2.6 RBP的分离纯化
• 1.2.7 RBP与其它蛋白质的相互作用
• 第二章 视黄醇结合蛋白在大肠肝菌中的表达
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 第三章 视黄醇结合蛋白在毕赤酵母中的表达
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 第四章 视黄醇结合蛋白与其它蛋白质相互作用的研究
• 4.1 基因的克隆
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.1.3 结果
• 4.1.4 讨论
• 4.2 免疫共沉淀和Western印迹
• 4.2.1 材料
• 4.2.2 方法
• 4.3 结果与讨论
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介