藠头活性物质的提取工艺优化及其抗菌抑癌作用的研究

论文摘要

目前癌症发病率高且难以治疗,在肿瘤的化疗过程中,常规的化学抗肿瘤药物在杀死肿瘤细胞的同时,对正常的免疫细胞也有杀伤作用,严重影响到了肿瘤病人的身体健康,因此,开发一种新型高效低毒的抗癌药物就成为了一种需要。许多药用植物内的活性成分能有效抑制细菌和肿瘤细胞的生长,增加化疗药物的敏感性和降低毒性的功效,因此对药用植物的研究在癌症的治疗上具有重要的市场价值。本文选取乙醇、甲醇、乙酸乙酯和水作为提取溶剂,对蕌头提取物的制备工艺进行了研究,根据相同条件下不同有机溶剂提取的藠头活性物抗菌活性强弱和提取液对人体的毒性大小,选取乙醇作为蕌头活性物的提取液。考察了不同温度、浓度、时间和料液四个条件因子对提取的蕌头活性物对白色念球菌抑制作用的影响,确定最佳蓖头活性物的制备条件。结果表明蕌头活性物的最佳提取条件为在30℃～50℃下,30%～50%乙醇溶液和鲜蕌头按照液料比（V:W）为1：1～2：1萃取4h～6h小时。各条件因子对蕌头活性物抗菌活性的影响大小依次为提取时间>乙醇浓度>温度>液料比。对蓖头提取物的抗肿瘤活性进行了研究,结果表明蓖头提取物对B16黑色素瘤细胞的体内和体外生长均具有明显的抑制作用,25μg/mL蕌头提取物对小鼠B16黑色素瘤细胞的抑制率为57.4%,IC50为1.78g/mL。通过对肿瘤细胞的形态学观察发现,蕌头活性物作用24h后肿瘤细胞形态学发生变化,细胞核质比变大,细胞生长间隙增加,细胞由梭形变为椭圆,且这种变化趋势呈浓度和时间依赖性。Tris-HCl法进一步提取蕌头活性物中的蛋白质成分,Brandford法测定蛋白含量,绘制标准曲线,计算得率。从干重150g蓖头中提取到56.4mg总蛋白质,得率为0.0376%。RP-HPLC和饱和硫酸铵盐析法分离蕌头蛋白质,研究其抗菌抑癌活性,发现RP-HPLC分离第16号分离峰具有抗菌活性,经80%硫酸铵盐析所得的蓖头蛋白质对肿瘤细胞的生长有抑制作用,该蛋白质作用24h后对B16黑色素瘤细胞和Meth-A细胞的抑制率分别为75.3%和61.6%,作用48h后抑制率分别为78.5%和66.4%,IC50分别为11.3μg/mL和13.0μg/mL。RP-HPLC和SDS-PAGE电泳分离、LC-MS鉴定蓖头蛋白质,发现其主要成分为凝集素,热休克蛋白,蒜氨酸酶,半胱氨酸合酶和肿瘤坏死因子受体蛋白等物质。有关蓖头提取物及蛋白质单一成分的分子结构和功能及作用机理有待进一步研究。

论文目录

• 缩略词表
• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 综述
• 1.1 中药活性成分的主要提取工艺
• 1.1.1 蒸馏法
• 1.1.2 溶剂萃取法
• 1.1.3 超声提取法
• 2超临界萃取法'>1.1.4 CO₂超临界萃取法
• 1.1.5 膜分离技术
• 1.1.6 分馏法
• 1.1.7 色谱法
• 1.1.8 高速逆流色谱
• 1.2 蕌头主要成分
• 1.2.1 挥发性成分
• 1.2.2 皂苷化合物
• 1.2.3 含氮化合物
• 1.3 蕌头的药理作用
• 1.3.1 对心血管系统作用
• 1.3.2 解痉平喘
• 1.3.3 抗氧化
• 1.3.4 抗肿瘤作用
• 1.3.5 抑菌杀虫
• 1.4 立题依据与意义
• 第二章 实验材料和方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 蕌头
• 2.1.2 供试细菌和细胞株
• 2.1.3 实验仪器
• 2.1.4 主要试剂
• 2.1.5 实验动物
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 蕌头提取物的制备优化及抗菌抑癌活性研究
• 2.2.2 蕌头蛋白质的分离纯化及抗菌抗肿瘤活性研究
• 第三章 实验结果
• 3.1 不同提取条件对蕌头抗菌活性的影响
• 3.1.1 不同溶剂对蓖头提取物抑菌活性的影响
• 3.1.2 不同乙醇浓度对蓖头提取物抑菌活性的影响
• 3.1.3 不同温度对蕌头提取物抑菌活性的影响
• 3.1.4 不同时间对蕌头提取物抑菌活性的影响
• 3.1.5 不同液料比对蕌头提取物抑菌活性的影响
• 3.1.6 蕌头提取物制备条件的确定及验证
• 3.2 蕌头提取物的抗肿瘤活性研究
• 3.2.1 蕌头提取物对小鼠B16细胞的体外抑制作用
• 3.2.2 蕌头提取物对B16黑色素瘤的体内抑制作用
• 3.2.3 蕌头提取物对小鼠B16黑色素瘤细胞的形态学影响
• 3.2.4 不同提取条件对蓖头活性物提取条件的色谱分析
• 3.3 蕌头蛋白质的分离纯化及抗菌抗肿瘤活性研究
• 3.3.1 蕌头蛋白的提取
• 3.3.2 蕌头蛋白质抗肿瘤活性研究
• 3.3.3 蕌头蛋白质的抗菌活性研究
• 3.3.4 蕌头蛋白质的分析鉴定
• 讨论
• 1 蕌头提取物制备方法的选择
• 2 提取液种类、浓度、温度、时间、液料比对蕌头提取物抗菌活性的影响
• 3 蕌头提取物抗菌的作用机理分析
• 4 蕌头提取物的抗肿瘤作用机理分析
• 5 蕌头蛋白质的抗菌成分鉴定
• 6 蕌头蛋白质的抗肿瘤成分鉴定
• 7 蕌头蛋白的可能作用机理
• 参考文献
• 附录
• 本论文感谢以下科技项目的资助
• 致谢