孕牛乳汁中早孕因子的分离纯化及部分特性的研究

论文摘要

本文通过纤维素离子交换层析、葡聚糖凝胶层析、亲和层析技术,从孕奶牛乳汁中进行早孕因子（EPF）分离与纯化,建立奶牛早孕因子（EPF）分离纯化技术路线,从而获得高纯度的奶牛早孕因子（EPF）。实验方法:采集怀孕4个月的孕奶牛乳汁,采用低温冷冻离心脱脂,将脱脂乳依次用硫酸铵分级盐析、DEAE-52纤维素离子交换层析、G-100葡聚糖凝胶层析、ConA-Sepharose FF 6B亲和层析技术分离纯化,得到高纯度奶牛早孕因子。用抑玫瑰花环试验对各阶段产物进行EPF活性检测,以SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测其分子量,以聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测其等电点。实验结果:经离子交换层析后,通过抑玫瑰花环试验对各回收峰进行EPF活性检测,有EPF活性的为峰DE-Ⅰ;经葡聚糖凝胶层析后,通过抑玫瑰花环试验对各回收峰进行EPF活性检测,有EPF活性的为峰G-Ⅲ;经亲和层析纯化孕奶牛乳清400ml,得到C-Ⅰ组分1.6811mg。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳见2条蛋白带,其相对分子质量为21.0kDa、67.0kDa,经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳测其等电点等电点为6.80。结论:本研究表明,这条分离纯化早孕因子的技术路线是可行的,得到的相对分子量为21.0 kDa、67.0kDa的高纯度奶牛早孕因子。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 引言
• 1.1 早孕因子的来源及存在部位
• 1.2 早孕因子分泌机制
• 1.3 早孕因子生物学特性
• 1.4 早孕因子的生物学作用
• 1.4.1 在生长调节中的作用
• 1.4.2 在生殖免疫学中的作用
• 1.5 早孕因子的临床应用
• 1.5.1 妊娠的超早期诊断
• 1.5.2 流产的预测
• 1.5.3 肿瘤诊断鉴别
• 1.5.4 其他方面的应用
• 1.6 早孕因子分离纯化
• 1.6.1 离子交换层析基本原理
• 1.6.2 凝胶层析的基本原理
• 1.6.3 亲和层析的基本原理
• 1.6.4 其他分离纯化的方法
• 1.7 早孕因子的应用前景
• 1.8 研究目的和意义
• 2 材料与方法
• 2.1 实验主要仪器与材料
• 2.1.1 主要仪器
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 实验材料
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 EPF 的分离纯化
• 2.2.2 EPF 活性测定
• 2.2.3 非孕牛乳汁的分离纯化
• 2.2.4 蛋白质含量测定
• 2.2.5 EPF 纯度分析
• 2.2.6 分子质量测定
• 2.2.7 等电点的测定
• 3 结果
• 3.1 EPF 的分离纯化结果
• 3.1.1 孕牛乳清中EPF 的提纯结果
• 3.1.2 阴性对照结果
• 3.2 SDS-PAGE 电泳结果
• 3.3 等电点测定结果
• 4 讨论
• 4.1 早孕因子的分离纯化技术
• 4.2 早孕因子的分子质量
• 4.3 早孕因子的等电点
• 4.4 早孕因子的活性检测
• 5 结论
• 致谢
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表的学术论文