脐带间充质干细胞体外分化为类固醇激素合成细胞的研究

论文摘要

类固醇激素生成因子-1（SF-1）能够调控类固醇激素合成酶的表达,在性腺与肾上腺的发育中有重要的意义。人脐带间充质干细胞具有自我更新与多向分化能力,本研究将脐带间充质干细胞诱导分化为类固醇激素合成细胞,并将其与骨髓间充质干细胞的分化能力进行比较。脐带间充质干细胞（UC-MSCs）与骨髓间充质干细胞BM-MSCs细胞均为典型的成纤维细胞形态,具有典型的间充质干细胞的细胞表面标志蛋白,都具有成脂分化、成骨分化及软骨分化的能力。但是跟BM-MSCs相比,UC-MSCs具有更强的体外扩增能力。用携带SF-1的腺病毒对间充质干细胞（MSCs）进行感染后,分化后UC-MSCs与BM-MSCs均能分泌皮质醇与睾酮,均表达3β-HSD,17β-HSD,P450SCC,P450C21等肾上腺皮质激素及性激素合成酶mRNA。另外,分化后的细胞均表达黄体生成素受体（LHR）及促肾上腺皮质激素受体（ACTH-R）,暗示分化后的细胞能够接受外源激素的调控,执行特定的生理功能。与BM-MSCs分化组相比,UC-MSCs分化组激素分泌能力、类固醇激素合成酶mRNA表达水平及分化后细胞活力更强,结果表明UC-MSCs比BM-MSCs具有更强的类固醇激素合成细胞分化能力。综上所述,UC-MSCs用携带SF-1的腺病毒诱导后,能够分化为类固醇激素合成细胞。与BM-MSCs相比,UC-MSCs取材容易且免疫原性低,具有更强的类固醇激素合成细胞分化能力,可以成为细胞治疗性腺功能减退及肾上腺功能不全的理想细胞来源。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 前言
• 1.1 间充质干细胞（MSCs）概述
• 1.1.1 干细胞的分类
• 1.1.2 间充质干细胞基本特征
• 1.1.3 间充质干细胞的生物学特征
• 1.1.4 骨髓间充质干细胞
• 1.1.5 脐带间充质干细胞
• 1.2 间充质干细胞向类固醇激素合成细胞分化的意义及研究进展
• 1.2.1 PADAM的现状及其治疗
• 1.2.2 睾丸间质细胞概述
• 1.2.3 雄激素的合成及其调控
• 1.2.4 间充质干细胞向类固醇激素合成激素分化的研究进展
• 1.3 选题的创新性、目的及意义
• 第2章 实验材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 骨髓及脐带材料来源
• 2.1.2 实验试剂
• 2.1.3 实验溶液及其配制
• 2.1.4 实验仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 UC-MSCs与BM-MSCs的分离及原代培养
• 2.2.2 MSCs的传代培养、冻存及复苏
• 2.2.3 流式细胞术鉴定MSCs
• 2.2.4 MSCs的多向分化潜能鉴定
• 2.4.5 UC-MSCs与BM-MSCs的增殖能力比较
• 2.4.6 携带SF-1 基因的腺病毒的制备及滴度测定
• 2.4.7 携带SF-1 基因的腺病毒感染UC-MSCs与BM-MSCs
• 2.4.8 Real-time RT-PCR技术鉴定基因表达
• 2.4.9 类固醇激素分泌检测
• 2.4.10 分化后细胞活力检测
• 2.4.11 统计学分析
• 第3章 实验结果
• 3.1 UC-MSCs与BM-MSCs的生物学特性
• 3.1.1 UC-MSCs与BM-MSCs的体外培养特征
• 3.1.2 UC-MSCs与BM-MSCs的FACS鉴定
• 3.1.3 UC-MSCs与BM-MSCs的成脂分化潜能鉴定
• 3.1.4 UC-MSCs与BM-MSCs的成骨分化潜能鉴定
• 3.1.5 UC-MSCs与BM-MSCs的软骨分化潜能鉴定
• 3.1.6 UC-MSCs与BM-MSCs的体外扩增能力比较
• 3.2 携带SF-1 基因的腺病毒感染MSCs结果分析
• 3.2.1 诱导分化后细胞细胞形态分析
• 3.2.2 Real-time RT-PCR鉴定分化后细胞基因表达
• 3.2.3 分化后细胞激素分泌检测
• 3.2.4 分化后细胞增殖情况检测
• 第4章 讨论与小结
• 4.1 讨论
• 4.2 小结
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历和在学期间发表论文情况